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文檔簡介
1、目的:通過觀察特定濃度的轉化生長因子β1(Transforming growth factorbetal,TGF-β1)在不同時間刺激體外培養(yǎng)種植體表面成骨細胞中幾種礦化相關蛋白[骨鈣素(osteocalcin,OC),骨涎蛋白(bonesialoprotein,BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)]的表達情況,探討TGF-β1對種植體表面成骨細胞增殖分化的影響,為臨床種植體的設計及今后臨床應用奠定基礎。
2、 方法:成品鈦片的表面處理(模擬體內(nèi)種植體),體外培養(yǎng)成骨細胞接種于鈦片表面(模擬種植體植入后的體內(nèi)環(huán)境),將其分為刺激組和對照組。加入地塞米松、抗壞血酸和β-甘油磷酸鈉,誘導礦化,刺激組分別加入0.5ng/ml、10ng/ml的TGF-β1刺激細胞增殖和分化,分別收集刺激后第2d、5d、7d培養(yǎng)的細胞,每3d換液一次。通過RT-PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain)檢測不同培養(yǎng)時間成
3、骨細胞中的礦化相關因子的OCmRNA,BSPmRNA,COLⅠmRNA表達,對照組不加TGF-β1。取對數(shù)生長期的成骨細胞,0.25%胰酶+0.02%EDTA消化,DMEM培養(yǎng)基混懸成單細胞懸液,計數(shù)細胞。實驗分為兩個濃度刺激組及一個對照組,按每孔1×105個細胞接種于6孔培養(yǎng)板中,置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細胞貼壁后更換培養(yǎng)液,DMEM+50ng抗壞血酸+10mMβ-甘油酸鈉+5nM地塞米松,分別加入0.5ng/ml、10n
4、g/ml的TGF-β1刺激細胞,對照組不加TGF-β1。分別收集培養(yǎng)后第2d、5d、7d的細胞,應用RT-PCR檢測蛋白表達情況并做對比分析。實驗中所有數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件作統(tǒng)計處理分析,比較各組間差異程度,P<0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。
結果:濃度為0.5ng/ml的外源性TGF-β1加入到接種于模擬體內(nèi)種植體的鈦片表面的成骨細胞中后,均可顯著增加成骨細胞中幾種礦化相關蛋白[骨鈣素(osteocalcin,O
5、C),骨涎蛋白(bonesialoprotein,BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)]的表達(P<0.05);而濃度為10ng/ml的外源性TGF-β1加入到接種于模擬體內(nèi)種植體的鈦片表面的成骨細胞中后,均可降低成骨細胞中幾種礦化相關蛋白[骨鈣素(osteocalcin,OC),骨涎蛋白(bonesialoprotein,BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)]的表達(P<0.05)。TGF-
6、β1刺激后的OC、BSP和COL-Ⅰ在不同時間培養(yǎng)的成骨細胞中的表達在凝膠成像系統(tǒng)光密度分析后可見與對照組中表達量相比,低濃度刺激組表達量略有升高,高濃度刺激組表達量略有降低。SPSS16.0軟件作統(tǒng)計處理分析P<0.05,變化有統(tǒng)計學意義。
結論:濃度為0.5ng/ml的外源性TGF-β1對加入到接種于模擬體內(nèi)種植體的鈦片表面的成骨細胞中的骨鈣素(osteocalcin,OC),骨涎蛋白(bonesialoprotein
7、,BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)的表達有一定的促進作用;而濃度為10ng/ml的外源性TGF-β1對加入到接種于模擬體內(nèi)種植體的鈦片表面的成骨細胞中的骨鈣素(osteocalcin,OC),骨涎蛋白(bonesialoprotein,BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)的表達有一定的抑制作用。本實驗選取了骨鈣素(osteocalcin,OC),骨涎蛋白(bonesialoprotein,
8、BSP)和Ⅰ型膠原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)三種礦化蛋白,通過體外構建的成骨細胞模型,利用RT-PCR的方法檢測不同濃度TGF-β1刺激前后不同培養(yǎng)時間點成骨細胞中OC、BSP和COL-Ⅰ的表達變化。所構建的體外成骨細胞模型很好地模擬了體內(nèi)種植體的成骨環(huán)境。模擬體內(nèi)種植體的鈦片與成骨細胞有良好的組織相容性,可以作為臨床種植體與成骨細胞相結合的依據(jù)。特定濃度TGF-β1可以影響種植體表面成骨細胞的增殖和分化。低濃度TGF-β
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