BALB-c小鼠過敏反應模型的建立及在中藥注射劑致敏性檢測中的應用.pdf

1、中藥注射劑（TraditionalChineseMedicineInjection，TCMI）是我國獨創(chuàng)的新劑型，具有給藥方便、生物利用度高、作用迅速等特點。但隨著臨床的廣泛應用，其不良反應尤其是過敏反應的報道日益增多，引起社會的高度重視。TCMI成分多樣，其潛在的致敏原既可能與大分子物質有關，也可能與小分子物質有關，或二者兼而有之，這都為過敏反應動物模型的建立提出更高要求。
　　 BALB/c小鼠不僅具有體積小，生長周期短，標

2、準化生物試劑容易獲取，免疫系統(tǒng)與人類接近等優(yōu)點，而且是一種高IgE表達、傾向于Th2型反應的小鼠品系，被廣泛用于過敏反應動物模型的構建。
　　 本研究以BALB/c小鼠為實驗對象，嘗試建立既可用于大分子物質檢測，又可用于小分子物質研究的全面的BALB/c小鼠過敏反應模型，從而有效消除不同動物模型檢測帶來的種屬差異，提高檢測的準確度和可靠性。然后將建好的模型用于清開靈注射液（QingkailingInjection，QKLI）和葛

3、根素注射液(GegensuInjection，GGSI)的致敏性研究，以期建立合適的過敏反應動物模型，為TCMI臨床前安全性評價提供實驗依據。
　　 本研究第一部分通過優(yōu)化致敏方法，包括致敏途徑、致敏次數(shù)、致敏劑量和抗體檢測時間;選擇合理的檢測指標，如致敏血清中總IgE、總IgG、特異性IgE抗體水平，脾細胞細胞因子水平和過敏反應癥狀的觀察等，建立用于大分子物質檢測的BALB/c小鼠過敏反應模型;然后分別選用三種具有不同致敏能力

4、的蛋白質卵白蛋白(Ovalbumin，OVA)、牛血清白蛋白(AlbuminBovine，BSA)和馬鈴薯酸性磷酸酶（Phosphatase，acid,frompotato，PAP）對所建模型進行驗證;最后將驗證好的模型用于QKLI、GGSI及QKLI相關組分蛋白提取物的致敏性研究。優(yōu)化后的致敏方法為:選用皮下致敏的途徑，0.5mg/只的致敏劑量，第1，7天致敏，第14天取血或激發(fā)。選擇的檢測指標為:血清特異性IgE抗體水平、脾細胞細胞

5、因子水平和過敏反應癥狀觀察等。在此基礎上，成功建立并驗證了用于大分子物質檢測的BALB/c小鼠過敏反應模型。模型應用發(fā)現(xiàn)水牛角蛋白提取物和梔子蛋白提取物的檢測結果陽性，提示QKLI誘導過敏反應的發(fā)生可能是由于注射液中混入了水牛角蛋白或梔子蛋白;GGSI未檢測到過敏反應的發(fā)生。
　　 本研究第二部分選用鹽酸D-青霉胺(D-penicillaminehydrochloride，D-pen)、鏈脲佐菌素(Streptozotocin，

6、STZ)為陽性對照藥，苯巴比妥(Phenobarbital，PB)為陰性對照藥，通過對陽性對照藥量-效關系和PLN解剖動力學的研究，選擇陽性對照藥的最低有效劑量和最佳解剖時間;在此基礎上，成功建立了BALB/c小鼠直接胭窩淋巴結試驗(thedirectpopliteallymphnodeassay，d-PLNA)和間接PLNA(thesecondaryPLNA，s-PLNA)模型;最后應用建好的模型檢測QKLI、GGSI及其組分提取物和