類過敏反應(yīng)檢測(cè)模型的建立及在中藥注射劑類過敏反應(yīng)檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、中藥注射劑是我國(guó)獨(dú)創(chuàng)的新劑型，具有生物利用度高、作用迅速等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于危重疾病的急救及感染性、心腦血管和惡性腫瘤等疾病的治療。隨著中藥注射劑在臨床的廣泛應(yīng)用，其不良反應(yīng)，尤其是速發(fā)型超敏反應(yīng)的發(fā)生逐漸增多。速發(fā)型超敏反應(yīng)包括Ⅰ型過敏反應(yīng)和類過敏反應(yīng)，兩者臨床癥狀、診斷及治療方法類似，因此臨床常將類過敏反應(yīng)診斷為Ⅰ型過敏反應(yīng)。
　　 目前臨床前安全性評(píng)價(jià)中尚沒有用于中藥注射劑類過敏反應(yīng)評(píng)價(jià)的模型，無法對(duì)中藥注射劑進(jìn)行有效的類

2、過敏反應(yīng)評(píng)價(jià)，因此，建立敏感可靠的類過敏反應(yīng)檢測(cè)模型是篩選中藥注射劑致敏原的前提，對(duì)于中藥注射劑的生存、發(fā)展和再創(chuàng)新十分重要。本研究是“國(guó)家重大新藥創(chuàng)制——中藥注射劑致敏性檢測(cè)關(guān)鍵技術(shù)的研究”課題的重要組成部分。
　　 實(shí)驗(yàn)一、大鼠類過敏反應(yīng)檢測(cè)模型的建立與應(yīng)用
　　 目的：建立可應(yīng)用于中藥注射劑的大鼠類過敏反應(yīng)檢測(cè)模型，并對(duì)清開靈注射液和葛根素注射液進(jìn)行類過敏反應(yīng)檢測(cè)。方法：利用組胺、Compound48/80、Twe

3、en80、聚氧乙烯蓖麻油(CrEL)、放射性造影劑(RCM，優(yōu)維顯和泛影葡胺)、萬古霉素對(duì)平均動(dòng)脈血壓(MABP)作為類過敏反應(yīng)檢測(cè)指標(biāo)的靈敏性和可靠性進(jìn)行探討；檢測(cè)大鼠注射Compound48/80、Tween80和CrEL后血漿組胺和補(bǔ)體末端復(fù)合物(SC5b-9)的變化，評(píng)價(jià)其作為類過敏反應(yīng)檢測(cè)指標(biāo)的靈敏性和可靠性；應(yīng)用建立的模型對(duì)清開靈注射液和葛根素注射液的類過敏反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：靜脈注射組胺、Compound48/80、優(yōu)維顯

4、、泛影葡胺和萬古霉素可引起大鼠MABP顯著下降，注射Tween80、CrEL對(duì)大鼠MABP影響不明顯；注射Compound48/80、Tween80和CrEL后，大鼠血漿組胺水平有顯著上升而SC5b-9升高不明顯；清開靈注射液能夠?qū)Υ笫螽a(chǎn)生劑量依賴性和給藥速度依賴性的MABP下降，并引起組胺水平的升高；葛根素注射液能夠?qū)Υ笫螽a(chǎn)生劑量和給藥速度依賴性的MABP下降，并引起SC5b-9水平的升高。結(jié)論：大鼠類過敏反應(yīng)檢測(cè)模型對(duì)RCM、萬古霉

5、素和中藥注射劑類過敏物質(zhì)具有良好的靈敏性；清開靈注射液和葛根素注射液可引起劑量依賴性和給藥速度依賴性的類過敏反應(yīng)。
　　 實(shí)驗(yàn)二、Beagle犬類過敏反應(yīng)檢測(cè)模型的建立與應(yīng)用
　　 目的：建立可應(yīng)用于中藥注射劑的Beagle犬類過敏反應(yīng)檢測(cè)模型，并對(duì)清開靈注射液和葛根素注射液進(jìn)行類過敏反應(yīng)檢測(cè)。方法：利用Compound48/80、Tween80、CrEL、RCM和萬古霉素對(duì)Beagle犬血漿組胺、免疫球蛋白E(IgE)

6、、SC5b-9以及MABP、呼吸頻率(RF)和心率(HR)等生理指標(biāo)作為類過敏反應(yīng)檢測(cè)指標(biāo)的敏感性進(jìn)行研究；應(yīng)用建立的模型對(duì)清開靈注射液和葛根素注射液的類過敏反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果：注射Compound48/80、Tween80、CrEL、RCM、萬古霉素后Beagle犬血漿組胺水平明顯升高，但無IgE水平的變化；其中Compound48/80、Tween80、CrEL和泛影葡胺可引起SC5b-9的升高和MABP的明顯降低；清開靈注射液30

7、0ml/h給藥速度（臨床最快滴注速度）下能夠引起B(yǎng)eagle犬血漿組胺水平的升高；葛根素注射液在90ml/h（臨床緩慢滴速）和300ml/h給藥速度下可引起B(yǎng)eagle犬血漿組胺和SC5b-9水平的升高，同時(shí)可引起MABP下降。結(jié)論：Beagle模型對(duì)增溶劑、泛影葡胺和中藥注射劑中存在的補(bǔ)體激活物質(zhì)具有良好的靈敏性；清開靈注射液和葛根素注射液可引起給藥速度依賴性的類過敏反應(yīng)，葛根素注射液引起的類過敏反應(yīng)與補(bǔ)體激活有關(guān)。
　　 實(shí)

8、驗(yàn)三、家貓安全性評(píng)價(jià)模型在類過敏反應(yīng)檢測(cè)中的應(yīng)用
　　 目的：應(yīng)用2005版《藥典》標(biāo)準(zhǔn)的安全性檢查法對(duì)清開靈注射液和葛根素注射液進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查。方法：按照藥典規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)“降壓物質(zhì)檢查法”對(duì)清開靈注射液和葛根素注射液進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查。結(jié)果：清開靈注射液降壓物質(zhì)檢查符合要求；葛根素注射液降壓物質(zhì)檢查不符合要求。結(jié)論：清開靈注射液具有降壓趨勢(shì)，而葛根素注射液的降壓物質(zhì)檢查沒有達(dá)到藥典要求。
　　 實(shí)驗(yàn)四、小鼠皮膚血管滲透性

9、類過敏反應(yīng)檢測(cè)模型的改進(jìn)與應(yīng)用
　　 目的：對(duì)原有小鼠皮膚血管滲透性實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ瓦M(jìn)行方法學(xué)改進(jìn)，并應(yīng)用于清開靈注射液和葛根素注射液的類過敏反應(yīng)檢測(cè)。方法：對(duì)小鼠皮膚血管滲透性實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證，建立誤差最小的檢測(cè)方法；對(duì)小鼠血管滲透性假陽性結(jié)果進(jìn)行分析，排除假陽性結(jié)果的影響；通過Compound48/80、Tween80、CrEL、RCM、萬古霉素等臨床報(bào)道有類過敏反應(yīng)發(fā)生的藥物對(duì)小鼠類過敏反應(yīng)檢測(cè)模型進(jìn)行敏感性分析；應(yīng)用建立的