類過敏反應檢測模型的建立及在中藥注射劑類過敏反應檢測中的應用.pdf

1、中藥注射劑是我國獨創(chuàng)的新劑型，具有生物利用度高、作用迅速等特點，已廣泛應用于危重疾病的急救及感染性、心腦血管和惡性腫瘤等疾病的治療。隨著中藥注射劑在臨床的廣泛應用，其不良反應，尤其是速發(fā)型超敏反應的發(fā)生逐漸增多。速發(fā)型超敏反應包括Ⅰ型過敏反應和類過敏反應，兩者臨床癥狀、診斷及治療方法類似，因此臨床常將類過敏反應診斷為Ⅰ型過敏反應。
　　 目前臨床前安全性評價中尚沒有用于中藥注射劑類過敏反應評價的模型，無法對中藥注射劑進行有效的類

2、過敏反應評價，因此，建立敏感可靠的類過敏反應檢測模型是篩選中藥注射劑致敏原的前提，對于中藥注射劑的生存、發(fā)展和再創(chuàng)新十分重要。本研究是“國家重大新藥創(chuàng)制——中藥注射劑致敏性檢測關鍵技術的研究”課題的重要組成部分。
　　 實驗一、大鼠類過敏反應檢測模型的建立與應用
　　 目的：建立可應用于中藥注射劑的大鼠類過敏反應檢測模型，并對清開靈注射液和葛根素注射液進行類過敏反應檢測。方法：利用組胺、Compound48/80、Twe

3、en80、聚氧乙烯蓖麻油(CrEL)、放射性造影劑(RCM，優(yōu)維顯和泛影葡胺)、萬古霉素對平均動脈血壓(MABP)作為類過敏反應檢測指標的靈敏性和可靠性進行探討；檢測大鼠注射Compound48/80、Tween80和CrEL后血漿組胺和補體末端復合物(SC5b-9)的變化，評價其作為類過敏反應檢測指標的靈敏性和可靠性；應用建立的模型對清開靈注射液和葛根素注射液的類過敏反應進行檢測。結果：靜脈注射組胺、Compound48/80、優(yōu)維顯

4、、泛影葡胺和萬古霉素可引起大鼠MABP顯著下降，注射Tween80、CrEL對大鼠MABP影響不明顯；注射Compound48/80、Tween80和CrEL后，大鼠血漿組胺水平有顯著上升而SC5b-9升高不明顯；清開靈注射液能夠?qū)Υ笫螽a(chǎn)生劑量依賴性和給藥速度依賴性的MABP下降，并引起組胺水平的升高；葛根素注射液能夠?qū)Υ笫螽a(chǎn)生劑量和給藥速度依賴性的MABP下降，并引起SC5b-9水平的升高。結論：大鼠類過敏反應檢測模型對RCM、萬古霉

5、素和中藥注射劑類過敏物質(zhì)具有良好的靈敏性；清開靈注射液和葛根素注射液可引起劑量依賴性和給藥速度依賴性的類過敏反應。
　　 實驗二、Beagle犬類過敏反應檢測模型的建立與應用
　　 目的：建立可應用于中藥注射劑的Beagle犬類過敏反應檢測模型，并對清開靈注射液和葛根素注射液進行類過敏反應檢測。方法：利用Compound48/80、Tween80、CrEL、RCM和萬古霉素對Beagle犬血漿組胺、免疫球蛋白E(IgE)

6、、SC5b-9以及MABP、呼吸頻率(RF)和心率(HR)等生理指標作為類過敏反應檢測指標的敏感性進行研究；應用建立的模型對清開靈注射液和葛根素注射液的類過敏反應進行檢測。結果：注射Compound48/80、Tween80、CrEL、RCM、萬古霉素后Beagle犬血漿組胺水平明顯升高，但無IgE水平的變化；其中Compound48/80、Tween80、CrEL和泛影葡胺可引起SC5b-9的升高和MABP的明顯降低；清開靈注射液30

7、0ml/h給藥速度（臨床最快滴注速度）下能夠引起B(yǎng)eagle犬血漿組胺水平的升高；葛根素注射液在90ml/h（臨床緩慢滴速）和300ml/h給藥速度下可引起B(yǎng)eagle犬血漿組胺和SC5b-9水平的升高，同時可引起MABP下降。結論：Beagle模型對增溶劑、泛影葡胺和中藥注射劑中存在的補體激活物質(zhì)具有良好的靈敏性；清開靈注射液和葛根素注射液可引起給藥速度依賴性的類過敏反應，葛根素注射液引起的類過敏反應與補體激活有關。
　　 實

8、驗三、家貓安全性評價模型在類過敏反應檢測中的應用
　　 目的：應用2005版《藥典》標準的安全性檢查法對清開靈注射液和葛根素注射液進行降壓物質(zhì)檢查。方法：按照藥典規(guī)定的標準“降壓物質(zhì)檢查法”對清開靈注射液和葛根素注射液進行降壓物質(zhì)檢查。結果：清開靈注射液降壓物質(zhì)檢查符合要求；葛根素注射液降壓物質(zhì)檢查不符合要求。結論：清開靈注射液具有降壓趨勢，而葛根素注射液的降壓物質(zhì)檢查沒有達到藥典要求。
　　 實驗四、小鼠皮膚血管滲透性

9、類過敏反應檢測模型的改進與應用
　　 目的：對原有小鼠皮膚血管滲透性實驗模型進行方法學改進，并應用于清開靈注射液和葛根素注射液的類過敏反應檢測。方法：對小鼠皮膚血管滲透性實驗方法進行方法學驗證，建立誤差最小的檢測方法；對小鼠血管滲透性假陽性結果進行分析，排除假陽性結果的影響；通過Compound48/80、Tween80、CrEL、RCM、萬古霉素等臨床報道有類過敏反應發(fā)生的藥物對小鼠類過敏反應檢測模型進行敏感性分析；應用建立的