轉(zhuǎn)mAM79基因玉米的獲得及草甘膦抗性分析.pdf

1、來源于細菌的EPSPS編碼基因AM79 aroA可用于培育抗草甘膦轉(zhuǎn)基因作物。實驗室前期工作對AM79 aroA基因進行了人工改造合成，合成的基因命名為mAM79。本研究對實驗室前期獲得的轉(zhuǎn)mAM79基因玉米材料進行了分子鑒定及草甘膦抗性分析。同時為了獲得更多的具有不同插入位點的轉(zhuǎn)基因事件，本研究將mAM79基因表達框插入到玉米Ds轉(zhuǎn)座子元件中，構(gòu)建了植物表達載體p3301-ZmDs-UbiSpAM79，將此載體轉(zhuǎn)化玉米，獲得了轉(zhuǎn)基因玉

2、米植株，并對轉(zhuǎn)基因植株的草甘膦抗性進行了初步分析。主要研究結(jié)果包括:
　　1、對實驗室前期獲得的轉(zhuǎn)基因玉米株系進行PCR分析，結(jié)果表明mAM79基因已經(jīng)整合到了這些轉(zhuǎn)基因玉米株系的基因組中。RT-PCR分析結(jié)果表明，mAM79基因在7個獨立的轉(zhuǎn)基因玉米株系中都有較高的轉(zhuǎn)錄水平。但是，Western blot分析結(jié)果表明，7個獨立的轉(zhuǎn)基因玉米株系中AM79 EPSPS蛋白水平有很大的差異，其中AM85和AM72這兩個株系的AM79

3、EPSPS蛋白表達量顯著高于其它株系。田間噴施4倍濃度的草甘膦時，這兩個轉(zhuǎn)基因株系能夠正常生長，其它轉(zhuǎn)基因玉米植株的生長均受到影響，而非轉(zhuǎn)基因玉米均死亡。研究結(jié)果表明mAM79基因可以用于培育抗草甘膦轉(zhuǎn)基因玉米，并且獲得的轉(zhuǎn)基因玉米株系可以作為培育抗草甘膦轉(zhuǎn)基因玉米的重要材料。
　　2、將mAM79基因表達框插入到玉米Ds轉(zhuǎn)座子元件中，構(gòu)建了植物表達載體p3301-ZmDs-UbiSpAM79，并將此植物表達載體通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)

4、化玉米，獲得5個轉(zhuǎn)基因玉米株系。對T1代轉(zhuǎn)基因植株的PCR分析結(jié)果表明，mAM79基因已經(jīng)整合到了這些轉(zhuǎn)基因玉米株系的基因組中。RT-PCR的分析結(jié)果表明，5個獨立的轉(zhuǎn)基因玉米株系中mAM79基因都有較高的轉(zhuǎn)錄水平。草甘膦噴施實驗結(jié)果表明，所獲得的轉(zhuǎn)基因玉米株系具有很好的草甘膦抗性。本研究獲得了具有較高草甘膦抗性的基于Ds的轉(zhuǎn)mAM79基因玉米，下一步是通過與含有Ac轉(zhuǎn)座酶的玉米活性系雜交，使mAM79基因表達框跳躍，以獲得更多的具有不