rAAV2-hEndo對人乳腺癌裸鼠移植瘤生長和微血管生成的影響.pdf

1、目的：探討2型重組腺相關病毒為載體的人血管內皮抑素基因對人乳腺癌裸小鼠移植瘤的治療作用以及2型重組腺相關病毒作為基因載體的可靠性和安全性，為臨床上應用血管內皮抑素基因治療乳腺癌提供新的思路和實驗依據。 方法：應用MCF-7人乳腺癌細胞株，在15只BALB/C-nu/nu裸小鼠（雌性，4-6周齡）鼠蹊部建立人乳腺癌裸小鼠皮下移植瘤模型。當移植瘤長至平均直徑約4mm時，將裸小鼠隨機分為兩組，實驗組10只，對照組5只。實驗組，于移植瘤

2、病灶局部注射5×109vg2型重組腺相關病毒為載體的人血管內皮抑素基因；對照組給予同劑量的空病毒。每隔一周重復給藥一次，共局部給藥三次。每兩天稱量一次裸小鼠體重，并分別測量腫瘤的長徑和短徑，計算腫瘤體積，繪制腫瘤生長曲線以觀察腫瘤生長的速度和血管內皮抑素基因對乳腺癌裸小鼠移植瘤的影響。第一次給藥后28天，即接種細胞后第40天處死全部實驗組和對照組裸小鼠，收集15例移植瘤的組織標本。標本的1/4部分行冰凍切片，并于熒光顯微鏡下觀察基因的轉

3、染情況。標本其余3/4部分行常規(guī)HE染色，觀察腫瘤組織的形態(tài)特征，并行免疫組織化學標記CD31和VEGF，以檢測腫瘤組織中MVD和血管內皮生長因子（VEGF）的表達。分析血管內皮抑素對腫瘤血管生成的影響及其分子作用機制。應用SPSS11．5統(tǒng)計軟件包對數據進行分析，以P<0．05為有統(tǒng)計學意義標準。 結果： （1）人乳腺癌細胞MCF-7在體外培養(yǎng)中生長情況良好，呈典型的上皮細胞形態(tài)，具有惡性腫瘤生長的特點。 （2

4、）人乳腺癌裸小鼠皮下移植瘤模型建立，裸小鼠一般狀況良好，接種細胞10日后，均可于移植部位觸及明顯腫塊，成瘤率達100％，平均成瘤時間為8天。 （3）應用2型重組腺相關病毒攜帶的人血管內皮抑素基因（rAAV2-hEndo）治療前，實驗組和對照組的腫瘤體積無明顯差別；接受治療第七天后，實驗組的腫瘤體積顯著小于對照組（P<0．05），且隨治療時間的延長兩組腫瘤體積差別逐漸增大；實驗結束時抑瘤率為66．09％。 （4）動物實驗過

5、程中，無一例裸小鼠意外死亡，未發(fā)現裸小鼠有病毒感染癥狀。 （5）熒光顯微鏡下，腫瘤組織中檢見大部分腫瘤細胞可激發(fā)出黃綠色熒光，提示腺相關病毒攜帶的血管內皮抑素基因轉染靶細胞。 （6）移植瘤巨檢，實驗組腫瘤體積平均為672．40±232．14 mm3，對照組腫瘤體積平均為1982．76±257．91mm3，差別有非常顯著的統(tǒng)計學意義（P=0．000）；HE染片中，移植瘤呈現典型的人乳腺浸潤性導管癌的特征。 （7）免

6、疫組化染色結果表明，實驗組MVD計數顯著低于對照組（P<0．05），且實驗組VEGF的表達亦顯著低于對照組（P<0．05）；相關性分析表明，實驗組和對照組MVD與VEGF的表達均呈現正相關（均P<0．05，r分別為0．75和0．92）。 結論： （1）人腫瘤細胞/裸小鼠系統(tǒng)是較為理想的人體腫瘤異種移植的動物模型。 （2）2型重組腺相關病毒轉染率較高，相對安全，可能成為基因治療腫瘤的理想載體之一。 （3）以