MAGE-A3多肽瘤苗對人乳腺癌細胞及裸鼠移植瘤免疫作用的實驗研究.pdf

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。與人體許多其它惡性腫瘤一樣，乳腺癌也是來自自身細胞的突變，因此抗原性較弱，并且腫瘤細胞可產生各種封閉因子使其逃逸機體的免疫監(jiān)控系統，同時患者的自身免疫系統呈現抑制性優(yōu)勢和癌組織局部的免疫功能低下，使機體的免疫機制已不能有效控制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，而針對乳腺癌的常規(guī)治療方法如放療、化療等對機體的免疫系統有明顯的抑制作用。因此，如何調動患者機體自身的防御機制，改善免疫功能狀態(tài)，探索新的針對乳腺癌的免疫治療方法

2、，一直是科學家們努力研究的焦點。近年來，樹突狀細胞(Dendritic Cell，DC)疫苗作為一種新的抗腫瘤免疫治療手段向人們展示了誘人的前景；但由于外周血中DC的數量僅占白細胞總數的0.1％，且患者的腫瘤細胞常常分泌一些細胞因子而抑制了DC的功能，因此通過體外培養(yǎng)的方式擴增DC，然后回輸體內激發(fā)機體的抗腫瘤免疫效應，具有重要的實用價值和理論意義。設計腫瘤治療性疫苗的關鍵是尋找到腫瘤的特異性靶抗原并將其輸送給機體的免疫系統，隨后被免疫

3、系統視為異物而被識別，最后激活的免疫系統通過一系列的作用機制將帶有腫瘤抗原的癌細胞摧毀?？乖鞍谆蚨嚯脑贒C內的轉運對于抗原的提呈及特異性免疫反應的誘導具有非常重要的作用，因此利用一些載體將腫瘤的抗原成分轉染至DC制備瘤苗，已成為腫瘤生物治療領域備受關注的熱點之一。由于病毒性載體存在自身免疫性反應和安全性問題，如外源性病毒DNA注入體內后，可能整合到宿主基因組上，使宿主細胞的抑癌基因失活或癌基因活化從而轉化成癌細胞，因此限制了其在臨床中

4、的廣泛應用；作為非病毒性載體系統的脂質體類物質在體內可自然降解、無免疫原性、可重復使用、無明顯的毒副作用等特點，在目前的抗腫瘤疫苗中具有獨特的作用。黑色素瘤抗原基因(Melalaoma associated antigerl gerle-A3，Mage-A3)編碼的抗原為HLA限制性的腫瘤排斥性抗原，在多種惡性腫瘤組織中表達，在除睪丸和胎盤以外的其他正常組織中均不表達，由于睪丸和胎盤組織中缺乏HLA-Ⅰ類分子的表達，使細胞毒性T淋巴細胞

5、(Cytotoxic T lymphocyte，CTL)無法發(fā)揮殺傷作用，同時睪丸和胎盤組織中的滋養(yǎng)細胞間連接十分緊密并表達CD95配體，從而形成了一個物理性和功能性的屏障，可阻止CTL的進入并可引起進入的T細胞發(fā)生凋亡，顯示了作為腫瘤治療性疫苗靶抗原的潛在價值。為此我們首先利用RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction，逆轉錄-多聚酶鏈反應)和SSP-PCR(seque

6、nce special primer polymerase chain reaction，序列特異性引物-多聚酶鏈反應)的方法，分別觀察了人乳腺癌MCF-7、卵巢癌SK-OV3及正常血管內皮EC-304等細胞株中MAGE-A3基因及人類白細胞抗原HLA-A2等位基因的表達情況；結果顯示：乳腺癌細胞株MCF-7中MAGE-A3及HLA-A2基因均為陽性表達，卵巢癌細胞株SK-OV3中Mage-A3基因呈陽性表達而HLA-A2則為陰性表達，

7、正常血管內皮細胞株EC-304中MAGE-A3為陰性表達而HLA-A2則為陽性表達。隨后從HLA-A2表達陽性的健康志愿者外周血中分離獲得單核細胞，在含有GM-CSF、IL-4和a-TNF等細胞因子的1640培養(yǎng)基誘導下繼續(xù)擴增培養(yǎng)，流式細胞儀檢測CD1a、HLA-DR、CD80、CD83、CD86的表達率分別由第1天的2.3％、46.2％、18.4％、8.36％、19.8％逐漸升至第3天的14.3％、57.8％、42.7％、9.2％、

8、47.8％及第6天的21.8％、99.0％、63.4％、18.9％、80.6％；其中代表DC成熟程度的CD83及HLA-Ⅱ類分子的表達均有明顯的增加。高倍相差顯微鏡及電鏡觀察可見形態(tài)特異的DC細胞，DC的得率從第1天的2.12％升至第3天的9.89％及第6天的16.31％，DC的純度從第1天的2.08％升至第3天的61.25％及第6天的90.83％，證實可以從外周血單核細胞中培養(yǎng)擴增出大量較高純度的DC細胞。本文探討了MAGE-A3多肽