腺病毒介導存活素RNA干涉對人乳腺癌裸鼠移植瘤抑制作用的研究.pdf

1、廣東醫(yī)學院碩士學位論文腺病毒介導存活素RNA干涉對人乳腺癌裸鼠移植瘤抑制作用的研究姓名：謝富華申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化學與分子生物學指導教師：梁念慈20070501腺病毒介導存活素R N A 干涉對人乳腺癌裸鼠移植瘤抑制作用的研究摘要目的探討腺病毒介導的R N A 干涉( R N A i n t e r f e r e n c e , R N A i ) 沉默存活素C S a r v i v i n )表達后，誘導人乳腺癌細胞株M

2、 C F - 7 凋亡的情況，并進一步研究S u r v i v i n 表達受抑制后對M C F - 7 細胞裸鼠人乳腺癌移植瘸的抑制作用．方法以S h u t t l eV e c t o r 1 ．0 - C M V 為載體構(gòu)建人s u r r ／v ／n 基因的4 個短發(fā)夾R N A ( s h o r t h a i r p i n R N A ，s h R N A ) 表達質(zhì)粒，其中一個為陰性對照；脂質(zhì)體法將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人乳腺癌

3、細胞株M C F - 7 ，通過比較各m K N A 的轉(zhuǎn)錄水平篩選出沉默效果最強的表達質(zhì)粒。構(gòu)建攜帶所篩選的s u r v ／v ／ns h R N A 表達質(zhì)粒和陰性對照質(zhì)粒的重組腺病毒( A d - s w - , , ／v ／n 和A d 刪蜘1 ) ；流式細胞術(shù)檢測該艨病毒介導的R N A i效應。建立入乳腺癌腫瘤模型：將M C T - 7 細胞種植到B l a b ／c - n u ／n u 裸小鼠的右前肢腋下：將成瘤的裸鼠

4、隨機分為三組，分別予P B S 、A d - c o n 血' o l 病毒懸液和A d - s u r t 州n 病毒懸液行瘤周和瘤體注射，同時觀察腫瘤生長情況；藥物處理結(jié)束后。收集標本，常規(guī)嗣片觀察組織學情況，并通過免疫組織化學檢測S u r v i v i n 蛋白表達情況．結(jié)果成功構(gòu)建針對人s u r r i r i ns h R N A 的表達質(zhì)粒；R T - P C R 法篩選出沉默效果最強的質(zhì)粒。成功構(gòu)建攜帶人s

5、u r v ／v ／n s h R N A 表達質(zhì)粒的重組腺病毒；流式細胞術(shù)檢測：腺病毒介導s u r r ／v ／ns h R N A 作用M C F - 7 細胞后導致細胞凋亡。成功建立人乳腺癌腫瘤模型：給藥后實驗組移植瘤的生長速度慢于對照組；免疫組織化學檢測發(fā)現(xiàn)實驗組的S u r v i v i n 蛋白表達受到抑制．結(jié)論1 ．構(gòu)建的人3 1 0 “ 1 P ／V ／? 1 s h R N A 表達質(zhì)粒，從m R N A 水平證實