上皮干細(xì)胞與肌纖維母細(xì)胞標(biāo)記物在胃癌發(fā)生發(fā)展中表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景和目的：
　　 研究背景：腫瘤組織由腫瘤細(xì)胞和間質(zhì)組成，腫瘤干細(xì)胞學(xué)說認(rèn)為腫瘤組織中存在極少量腫瘤細(xì)胞充當(dāng)干細(xì)胞角色，具有自我更新、增殖能力及多向分化潛能，產(chǎn)生不同表型的腫瘤細(xì)胞，使腫瘤在體內(nèi)不斷擴(kuò)大，或形成新的腫瘤。胃上皮干細(xì)胞異常分化可以導(dǎo)致胃癌發(fā)生，研究正常和異常上皮干細(xì)胞生物學(xué)特點(diǎn)，有助于揭示胃癌的起源。肌纖維母細(xì)胞是一種超微結(jié)構(gòu)介于平滑肌細(xì)胞和纖維母細(xì)胞之間的特殊類型細(xì)胞，能夠產(chǎn)生大量上皮生長因子，被認(rèn)為是最為

2、重要的一類間質(zhì)細(xì)胞，但在胃癌發(fā)生過程中的變化尚不清楚。按胃癌起源，Lauren將其分為腸型和彌漫型，腸型和彌漫型胃癌臨床病理的差別可能源于其上皮干細(xì)胞的數(shù)量和基因差異。多數(shù)惡性腫瘤的結(jié)構(gòu)成分中約一半是間質(zhì)，腫瘤相關(guān)肌纖維母細(xì)胞在胃癌進(jìn)展中可能起作用。因此本研究目的包括：
　　 1、觀察胃上皮干細(xì)胞標(biāo)記物Musashi-1和間質(zhì)肌纖維母細(xì)胞標(biāo)記物α-SMA在正常胃粘膜、增生性息肉、腸化生、上皮內(nèi)瘤變、胃癌中的表達(dá)變化，分析Musa

3、shi-1、α-SMA與增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的關(guān)系，探討上皮干細(xì)胞和間質(zhì)肌纖維母細(xì)胞在胃癌發(fā)生過程中的變化，及與細(xì)胞增殖活性和癌變可能機(jī)制的關(guān)系。
　　 2、比較腸型和彌漫型胃癌Musashi-1、PCNA和α-SMA表達(dá)，并觀察具有降解細(xì)胞外間質(zhì)作用的基質(zhì)金屬蛋白酶-7(MMP-7)和具有促進(jìn)增殖作用的胰島素樣生長因子-2(IGF-2)在腸型和彌漫型胃癌中表達(dá)的差別，探討腸型和彌漫型胃癌中腫瘤干細(xì)胞和肌纖維母細(xì)胞的差異及

4、與胃癌侵襲、轉(zhuǎn)移的關(guān)系。
　　 研究方法：
　　 1、收集2008年9月至2010年8月間山東大學(xué)齊魯醫(yī)院內(nèi)鏡室胃鏡活檢及普外科手術(shù)的胃竇標(biāo)本，其中胃鏡活檢標(biāo)本182例，包括：正常胃粘膜(炎癥均為輕度以下)21例，增生性息肉32例，腸上皮化生31例，低級別上皮內(nèi)瘤變57例，高級別上皮內(nèi)瘤變41例；胃癌50例來自病理科手術(shù)切除標(biāo)本，術(shù)后病理均證實(shí)為腺癌。標(biāo)本經(jīng)10％多聚甲醛固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。采用微波

5、EDTA抗原修復(fù)法，采用兩步法免疫組化方法檢測干細(xì)胞標(biāo)記物Musashi-1、肌纖維母細(xì)胞標(biāo)記物α-SMA，并與PCNA表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。
　　 2、收集50例胃癌手術(shù)切除標(biāo)本患者的臨床病理資料，包括患者年齡、性別、Lauren分類、腫瘤大小、TNM分期等，采用免疫組化方法檢測胃癌組織中Musashi-1、α-SMA、PCNA、MMP-7、IGF-2表達(dá)，比較腸型胃癌和彌漫型胃癌表達(dá)情況，并與患者臨床病理資料進(jìn)行比較分析。

6、r>　　 結(jié)果：
　　 1.正常胃粘膜PCNA和Musashi-1陽性細(xì)胞局限于胃腺頸部的增殖區(qū)，增生性息肉中PCNA表達(dá)高于正常胃粘膜(U=164.00，P<0.01)，卻極少發(fā)現(xiàn)Musashi-1陽性細(xì)胞。腸化生粘膜Musashi-1表達(dá)較正常胃粘膜升高(U=227.50，P<0.05)，其PCNA表達(dá)較增生性息肉也升高(U=108.00，P<0.01)。腸化生和低、高級別上皮內(nèi)瘤變中PCNA、Musashi-1表達(dá)無顯著

7、性差異。胃癌中Musashi-1表達(dá)比高級別上皮內(nèi)瘤變升高(U=789.00，P<0.05)，PCNA表達(dá)比高級別上皮內(nèi)瘤變也升高(U=650.00，P<0.01)。Musashi-1和PCNA表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.34 P<0.01)。
　　 2.α-SMA陽性細(xì)胞在正常粘膜和增生性息肉中散在無規(guī)律地分布于腺體之間，在增生性息肉中略有增高(U=276.00，P>0.05)；在腸化生粘膜中α-SMA陽性細(xì)胞較增生性息肉顯著增高

8、(U=256.00，P<0.01)，并且在腸化腺體的周圍呈包裹腺體樣分布；在上皮內(nèi)瘤變中α-SMA表達(dá)也呈腺體周圍模式，但明顯不如腸化生粘膜顯著和規(guī)則，并且低、高級別上皮內(nèi)瘤變較腸化生粘膜中α-SMA陽性細(xì)胞數(shù)量呈下降趨勢(x2=6.42，P<0.05)；胃癌中α-SMA陽性細(xì)胞不再呈腺周分布模式，而是在癌巢間呈無規(guī)律的小片狀分布或團(tuán)塊狀、條索狀分布；胃癌中α-SMA表達(dá)比上皮內(nèi)瘤變顯著增高(U=600.00，P<0.01)，較腸化生粘

9、膜略增高(U=624.50，P>0.05)。α-SMA和PCNA表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.39 P<0.01)。
　　 3.Musashi-1表達(dá)在彌漫型胃癌比腸型胃癌升高(x2=16.96，P<0.01)，Musashi-1表達(dá)在胃癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組升高(x2=13.45，P<0.01)，在胃癌Ⅱ-Ⅳ期組比Ⅰ期組升高(x2=11.88，P<0.01)；α-SMA表達(dá)在腸型胃癌和彌漫型胃癌無顯著性差異(x2=2.98

10、，P>0.05)，α-SMA表達(dá)與腫瘤浸潤深度密切相關(guān)，在胃癌T2-4組比<=T11升高(x2=11.38，P<0.05)，在胃癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組升高(x2=9.67，P<0.05)，在胃癌>5cm組比<=5cm組升高(x2=9.79，P<0.05)。
　　 4、彌漫型胃癌中PCNA、MMP-7表達(dá)較腸型胃癌升高(x2=6.52，P<0.05；x2=19.54，P<0.01)，彌漫型胃癌IGF-2多表達(dá)在細(xì)胞核(2

11、1/23)，腸型胃癌IGF-2多表達(dá)在細(xì)胞漿中(24/27)，兩者有顯著性差異(x2=32.00，P<0.01)。PCNA高表達(dá)與胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤大小有關(guān)；MMP-7高表達(dá)與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分期有關(guān)；IGF-2細(xì)胞核表達(dá)與胃癌浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分期有關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1.在胃增生性息肉，上皮干細(xì)胞增殖有限并分化為大量上皮細(xì)胞，PCNA表達(dá)增強(qiáng)，但Musashi-1表達(dá)隨干細(xì)胞分化迅速下

12、降，提示良性病變中上皮干細(xì)胞自我復(fù)制被控制在有限范圍內(nèi)。
　　 2、腸化生上皮與低、高級別上皮內(nèi)瘤變有相似的上皮干細(xì)胞增殖活性。腸上皮化生粘膜中的Musashi-1陽性細(xì)胞可能是腸化生-上皮內(nèi)瘤變-腺癌發(fā)生途徑的始動環(huán)節(jié)中的早期事件，上皮干細(xì)胞自我復(fù)制過程失調(diào)導(dǎo)致干細(xì)胞擴(kuò)增可能在胃癌發(fā)生過程的早期事件中起關(guān)鍵作用。
　　 3、胃癌中Musashi-1、PCNA表達(dá)比癌前病變均增高，提示胃癌干細(xì)胞較癌前病變中干細(xì)胞具有更強(qiáng)

13、增殖能力。
　　 4、胃癌惡性轉(zhuǎn)化過程中肌纖維母細(xì)胞不但有數(shù)量變化，還有分布模式和位置的改變。從正常粘膜到腸化生粘膜，肌纖維母細(xì)胞逐漸增多，并且在腸化腺體形成腺周包裹式的表達(dá)模式；但是從腸化生粘膜到低、高級別瘤變，肌纖維母細(xì)胞又逐漸減少并且腺周表達(dá)模式弱化；胃癌中腺周肌纖維母細(xì)胞消失，而被腫瘤相關(guān)肌纖維母細(xì)胞代替并呈雜亂無章分布，這表明在胃癌發(fā)展不同階段，肌纖維母細(xì)胞功能具有異質(zhì)性。在癌前病變中的腺周肌纖維母細(xì)胞可能具有早期防御

14、功能，腫瘤相關(guān)肌纖維母細(xì)胞具有促進(jìn)胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移的作用。腸型與彌漫型胃癌的間質(zhì)肌纖維母細(xì)胞無顯著差別。胃癌的惡性轉(zhuǎn)化過程為上皮細(xì)胞和間質(zhì)肌纖維母細(xì)胞的共同作用。
　　 5、胃癌中Musashi-1過表達(dá)可能促進(jìn)癌干細(xì)胞自我復(fù)制，Musashi-1陽性細(xì)胞在胃癌侵襲轉(zhuǎn)移中起主導(dǎo)作用。彌漫型胃癌干細(xì)胞可能比腸型胃癌具有更高的增殖能力，并可能與彌漫型胃癌分化較差有關(guān)。
　　 6.胃癌細(xì)胞的MMP-7高表達(dá)及IGF-2細(xì)胞核表達(dá)