人核誘導凋亡因子1(NAIF1)基因在胃癌及乳腺癌中的差異表達及功能研究.pdf

1、核誘導凋亡因子1(nuclear apoptosis—inducing factor1,NAIF1)是一個新發(fā)現(xiàn)的核誘導凋亡蛋白,之前的研究表明其在宮頸癌細胞系HeLa丑人胚腎細胞系HEK293中過表達時能誘導凋亡,但具體的機制還尚未闡明。另有研究發(fā)現(xiàn)在HeLa細胞中NAIF1可以靠其Myb-like結(jié)構(gòu)域(Myb-like domain)與HARB1結(jié)合并幫助后者入核,而HARB1是迄今唯一已知的與PIF/Harbinger轉(zhuǎn)座元件同

2、源的脊椎動物基因。因此,NAIF1可能在脊椎動物的轉(zhuǎn)座方面發(fā)揮重要功能。但NAIF1在腫瘤與正常組織中的表達情況及在其腫瘤細胞中的功能相關研究還未見報道。
　　 本研究建立了人NAIF1蛋白的原核高效表達體系及純化方法,并應用該方法獲得一定數(shù)量和純度的原核重組表達蛋白,同時用該蛋白作為抗原,制備了兔抗人NAIF1多克隆抗體,為后續(xù)工作提供了研究基礎。此外,我們利用該抗體對人NAIF1蛋白在正常和腫瘤組織中的表達進行了研究。組織芯

3、片和病理切片免疫組化結(jié)果顯示,NAIF1在人正常胃組織和正常乳腺組織中呈現(xiàn)高表達,而對應的胃癌組織和乳腺癌組織中NAIF1呈現(xiàn)低表達或者不表達(P＜0.001)。我們還對NAIF1表達水平與臨床參數(shù)如腫瘤分期、分級、性別、年齡等因素作了相關性分析。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),NAIF1在高分化胃癌組織中的表達要高于中、低分化胃癌組織(P=0.004)；并且NAIF1的表達量隨著胃癌T分期從T1至T4期的發(fā)展而逐漸降低(P=0.024)。在胃癌細胞系M

4、KN-45中,我們發(fā)現(xiàn)NAIF1能抑制MKN-45的生長,流式細胞術分析結(jié)果顯示NAI目的過表達能引起MKN-45細胞系出現(xiàn)sub-G1期峰,形態(tài)學分析MKN-45細胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學特點,機制分析結(jié)果顯示NAIF1在MKN-45細胞中高表達后,導致野生型P53和Bax表達上升,Bcl-2表達下降,并且通過活化procaspase-9而不活化procaspase-8進而激活procaspase-3和IPARP從而誘導凋亡。另外,我們

5、還構(gòu)建了兩個NAI目的截短體,pEGFP-N1-NLS(1-90)和pEGFP-N1-GRR(1-117),并且通過研究發(fā)現(xiàn)NAIF1只需其N端片段(1-90aa)即可誘發(fā)凋亡。在乳腺癌細胞系MCF-7中,我們發(fā)現(xiàn)NAIF1高表達對其生長沒有抑制作用,也不誘導凋亡(48 h),但能抑制細胞的體外遷移和體外侵襲能力(P＜0.001),機制分析結(jié)果顯示NAIF1可能是通過抑制FAK的Try397位、ERK的Thr202/Tyr204位磷酸化