人核誘導(dǎo)凋亡因子1(NAIF1)基因在胃癌及乳腺癌中的差異表達(dá)及功能研究.pdf

1、核誘導(dǎo)凋亡因子1(nuclear apoptosis—inducing factor1,NAIF1)是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的核誘導(dǎo)凋亡蛋白,之前的研究表明其在宮頸癌細(xì)胞系HeLa丑人胚腎細(xì)胞系HEK293中過表達(dá)時(shí)能誘導(dǎo)凋亡,但具體的機(jī)制還尚未闡明。另有研究發(fā)現(xiàn)在HeLa細(xì)胞中NAIF1可以靠其Myb-like結(jié)構(gòu)域(Myb-like domain)與HARB1結(jié)合并幫助后者入核,而HARB1是迄今唯一已知的與PIF/Harbinger轉(zhuǎn)座元件同

2、源的脊椎動(dòng)物基因。因此,NAIF1可能在脊椎動(dòng)物的轉(zhuǎn)座方面發(fā)揮重要功能。但NAIF1在腫瘤與正常組織中的表達(dá)情況及在其腫瘤細(xì)胞中的功能相關(guān)研究還未見報(bào)道。
　　 本研究建立了人NAIF1蛋白的原核高效表達(dá)體系及純化方法,并應(yīng)用該方法獲得一定數(shù)量和純度的原核重組表達(dá)蛋白,同時(shí)用該蛋白作為抗原,制備了兔抗人NAIF1多克隆抗體,為后續(xù)工作提供了研究基礎(chǔ)。此外,我們利用該抗體對人NAIF1蛋白在正常和腫瘤組織中的表達(dá)進(jìn)行了研究。組織芯

3、片和病理切片免疫組化結(jié)果顯示,NAIF1在人正常胃組織和正常乳腺組織中呈現(xiàn)高表達(dá),而對應(yīng)的胃癌組織和乳腺癌組織中NAIF1呈現(xiàn)低表達(dá)或者不表達(dá)(P＜0.001)。我們還對NAIF1表達(dá)水平與臨床參數(shù)如腫瘤分期、分級(jí)、性別、年齡等因素作了相關(guān)性分析。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),NAIF1在高分化胃癌組織中的表達(dá)要高于中、低分化胃癌組織(P=0.004)；并且NAIF1的表達(dá)量隨著胃癌T分期從T1至T4期的發(fā)展而逐漸降低(P=0.024)。在胃癌細(xì)胞系M

4、KN-45中,我們發(fā)現(xiàn)NAIF1能抑制MKN-45的生長,流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示NAI目的過表達(dá)能引起MKN-45細(xì)胞系出現(xiàn)sub-G1期峰,形態(tài)學(xué)分析MKN-45細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡形態(tài)學(xué)特點(diǎn),機(jī)制分析結(jié)果顯示NAIF1在MKN-45細(xì)胞中高表達(dá)后,導(dǎo)致野生型P53和Bax表達(dá)上升,Bcl-2表達(dá)下降,并且通過活化procaspase-9而不活化procaspase-8進(jìn)而激活procaspase-3和IPARP從而誘導(dǎo)凋亡。另外,我們

5、還構(gòu)建了兩個(gè)NAI目的截短體,pEGFP-N1-NLS(1-90)和pEGFP-N1-GRR(1-117),并且通過研究發(fā)現(xiàn)NAIF1只需其N端片段(1-90aa)即可誘發(fā)凋亡。在乳腺癌細(xì)胞系MCF-7中,我們發(fā)現(xiàn)NAIF1高表達(dá)對其生長沒有抑制作用,也不誘導(dǎo)凋亡(48 h),但能抑制細(xì)胞的體外遷移和體外侵襲能力(P＜0.001),機(jī)制分析結(jié)果顯示NAIF1可能是通過抑制FAK的Try397位、ERK的Thr202/Tyr204位磷酸化