乳腺癌中LRP16基因的表達(dá)及功能研究.pdf

1、目的：①探索乳腺癌組織中的LRP16基因mRNA的表達(dá)水平及其臨床病理意義；②研究LRP16基因的表達(dá)與乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)性；③進(jìn)一步探討LRP16基因在乳腺癌治療中潛在的靶向性意義。 方法：①收集乳腺癌手術(shù)切除的新鮮組織標(biāo)本和部分臨床病理診斷資料，運(yùn)用NorthernBlot方法檢測(cè)乳腺癌及癌旁臨床組織標(biāo)本的LRP16基因mRNA的表達(dá)水平。②選擇雌激素受體陽性的并經(jīng)RNA干擾分別抑制了LRP16基因乖GFP基因表達(dá)的乳腺

2、癌MCF-7細(xì)胞株(M-pL374，M-pL668、M-pLGFPi)，建立腫瘤細(xì)胞Transwell運(yùn)動(dòng)、粘附和侵襲轉(zhuǎn)移模型和FVB小鼠肺轉(zhuǎn)移模型，并用WesternBlot或免疫組化的方法檢測(cè)細(xì)胞粘附分子E-cardherin、基質(zhì)金屬蛋白酶MMPs的表達(dá)水平。③經(jīng)抗雌激素處理MCF-7細(xì)胞株后，用NorthernBlot檢測(cè)LRP16mRNA表達(dá)的時(shí)效性變化；觀察M-pL374、M-pL668、M-pLGFPi細(xì)胞對(duì)放療和化療的敏

3、感性差異。 結(jié)果：①以β-actin為內(nèi)參照，22例癌標(biāo)本LRP16mRNA的表達(dá)較癌旁組織高2倍的有9例，過表達(dá)率約40％(9/22)，其中高2～3倍有4例，高3～5倍的也有4例，只1例存在6倍的差距。 ②腫瘤直徑小于3cm的9例，其中過表達(dá)LRP16僅1例；直徑3～5cm的13例中過表達(dá)LRP16就有8例，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Fish's檢驗(yàn)，P=0.031)。22例中有12例腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其中8例過表達(dá)LRP16，而無

4、轉(zhuǎn)移10例中只1例過表達(dá)，有顯著差異(Fish's檢驗(yàn)，P=0.011)。過表達(dá)LRP16的9例臨床分期：Ⅰ期1例(T1N0M0)、Ⅱ期4例、Ⅲ期4例。 ③Ki-67、T0P0Ⅱα陽性率分別是82％(18/22)、72.7％(16/22)，Ki-67、T0P0Ⅱα均為陰性的只兩例，且LRP16均非過表達(dá)。Ki-67高表達(dá)(標(biāo)記指數(shù)大于50％)與LRP16的過表達(dá)具有相關(guān)性(P=0.0467)。ER(estrogenrecepte

5、r)和PR(progestinrecepter)陽性均有13例(陽性率59％)。過表達(dá)LRP16的有7例ER陽性(7/9)；而非過表達(dá)LRP16的患者，ER陽性6例(6/13)，但無顯著差異(P=0.1380)。PR在LRP16過表達(dá)組陽性8例(8/9)，非過表達(dá)組5例(5/13)，統(tǒng)計(jì)差異明顯(P=0.0180)。④細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)，60min內(nèi)M-pLGFPi有約80％已經(jīng)粘附于matrigel膜，而M-pL374細(xì)胞不到60％，120

6、min兩種細(xì)胞約95％粘附貼壁，30min到90min的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞爬片劃痕實(shí)驗(yàn)，48h內(nèi)M-pLGFPi細(xì)胞可生長(zhǎng)鋪滿劃痕，而M-pL374細(xì)胞卻不能。Transwell細(xì)胞運(yùn)動(dòng)穿膜實(shí)驗(yàn)，24hM-pLGFPi細(xì)胞比M-pL374細(xì)胞多45％左右。細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)，M-pLGFPi細(xì)胞是M-pL374細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量的2倍以上。FVB小鼠肺表面的轉(zhuǎn)移腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)：M-pLGFPi細(xì)胞21.8±4.45，M-pL374細(xì)胞9.6±2.0

7、8。 ⑤M-pL374或M-pL668細(xì)胞E-cadherind的mRNA和蛋白水平是M-pLGFPi細(xì)胞2～5倍，說明MCF-7細(xì)胞LRP16mRNA的表達(dá)與E-cadherin的表達(dá)呈反相關(guān)。而MMPs的表達(dá)水平卻沒有差異。 ⑥經(jīng)抗雌激素處理MCF-7細(xì)胞后，3h內(nèi)LRP16的表達(dá)即顯著下降，12h表達(dá)最低，24h恢復(fù)到處理前水平。20Gy的劑量照射細(xì)胞，3～10h時(shí)M-pL374細(xì)胞的死亡率高于M-pLGFPi細(xì)胞

8、。但是用化療藥5-氟尿嘧啶(5-FU)、大劑量環(huán)磷酰胺(CTX)處理后，M-pLGFPi細(xì)胞的死亡敏感性高于M-pL374細(xì)胞；化療藥物氨甲喋呤(MTX)、吡柔比星(THP)和順鉑(DDP)卻沒有明顯差異。 結(jié)論：①在乳腺癌組織中有約40％的過表達(dá)LRP16mRNA，LRP16mRNA的高表達(dá)與腫瘤直徑、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期和Ki-67、及ER、PR陽性率密切相關(guān)，提示LRP16基因可能在細(xì)胞增殖活躍、腫瘤直徑較大并有遠(yuǎn)處淋

9、巴轉(zhuǎn)移的患者中表達(dá)增強(qiáng)。 ②在體外模型和動(dòng)物模型上，抑制LRP16的表達(dá)可以降低MCF-7細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、粘附和侵襲轉(zhuǎn)移的能力，可以提高細(xì)胞間粘附分子E-cardherin表達(dá)，提示LRP16是一個(gè)受雌激素調(diào)控的、并與乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因。 ③抗雌激素處理MCF-7細(xì)胞后，LRP16mRNA表達(dá)水平降低。抑制LRP16基因的表達(dá)，可以提高M(jìn)CF-7細(xì)胞對(duì)放療的敏感性，卻降低了部分化療藥物對(duì)MCF-7細(xì)胞殺傷活性，提示LRP