IL-29和IFN-α體外抗乙肝病毒作用與機制探討.pdf

1、目的：探討IFN-α和IL-29在HepG2.2.15細胞中抗乙肝病毒的作用機制。
　　 方法：培養(yǎng)HepG2.2.15細胞，并使用IL-29和IFN-α處理細胞，通過RT-PCR、普通PCR與Real-time PCR，從mRNA水平探討IL-29抗乙肝病毒的效果；并分析IL-29和IFN-α誘導抗病毒蛋白MxA、2',5'-OAS和PKR的mRNA表達水平。同時使用Western-Blot分析IL-29和IFN-α激活的信號

2、通路。再使用相關(guān)信號通路的特異性阻斷劑，阻斷IL-29和IFN-α激活的相關(guān)信號通路，從而探討信號通路與抗病毒蛋白轉(zhuǎn)錄表達之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：IL-29和IFN-α能明顯降低HepG2.2.15細胞中乙肝病毒mRNA的表達水平，且能夠上調(diào)抗病毒蛋白MxA和2',5'-OAS的mRNA表達（IFN-α還能夠上調(diào)PKR的轉(zhuǎn)錄），并能促進AKT和ERK的磷酸化。使用LY294002(50 μM)和PD98059 (100 μM)

3、能夠分別有效抑制HepG2.2.15細胞中AKT和ERK的磷酸化，并且當預先使用LY294002和PD98059 處理細胞1小時，再加入IL-29或IFN-α刺激HepG2.2.15細胞后，使用Western Blot技術(shù)無法檢測到P-AKT和P-ERK的存在。當AKT磷酸化被抑制時，抗病毒蛋白2’，5'-OAS、MxA和PKR轉(zhuǎn)錄水平的表達也相應(yīng)降低；當ERK磷酸化被阻斷時，MxA轉(zhuǎn)錄顯著增強，但是2’，5'-OAS和PKR的表達卻無