IL-29和IFN-α體外抗乙肝病毒作用與機(jī)制探討.pdf

1、目的：探討IFN-α和IL-29在HepG2.2.15細(xì)胞中抗乙肝病毒的作用機(jī)制。
　　 方法：培養(yǎng)HepG2.2.15細(xì)胞，并使用IL-29和IFN-α處理細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR、普通PCR與Real-time PCR，從mRNA水平探討IL-29抗乙肝病毒的效果；并分析IL-29和IFN-α誘導(dǎo)抗病毒蛋白MxA、2',5'-OAS和PKR的mRNA表達(dá)水平。同時(shí)使用Western-Blot分析IL-29和IFN-α激活的信號(hào)

2、通路。再使用相關(guān)信號(hào)通路的特異性阻斷劑，阻斷IL-29和IFN-α激活的相關(guān)信號(hào)通路，從而探討信號(hào)通路與抗病毒蛋白轉(zhuǎn)錄表達(dá)之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：IL-29和IFN-α能明顯降低HepG2.2.15細(xì)胞中乙肝病毒mRNA的表達(dá)水平，且能夠上調(diào)抗病毒蛋白MxA和2',5'-OAS的mRNA表達(dá)（IFN-α還能夠上調(diào)PKR的轉(zhuǎn)錄），并能促進(jìn)AKT和ERK的磷酸化。使用LY294002(50 μM)和PD98059 (100 μM)

3、能夠分別有效抑制HepG2.2.15細(xì)胞中AKT和ERK的磷酸化，并且當(dāng)預(yù)先使用LY294002和PD98059 處理細(xì)胞1小時(shí)，再加入IL-29或IFN-α刺激HepG2.2.15細(xì)胞后，使用Western Blot技術(shù)無(wú)法檢測(cè)到P-AKT和P-ERK的存在。當(dāng)AKT磷酸化被抑制時(shí)，抗病毒蛋白2’，5'-OAS、MxA和PKR轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)也相應(yīng)降低；當(dāng)ERK磷酸化被阻斷時(shí)，MxA轉(zhuǎn)錄顯著增強(qiáng)，但是2’，5'-OAS和PKR的表達(dá)卻無(wú)