有機(jī)介質(zhì)中外消旋丁基苯酞的酶法拆分.pdf

1、丁基苯酞是國家一類新藥，可有效治療腦血管病，其中起主要作用的是(S)-丁基苯酞。本課題通過選擇最合適的技術(shù)路線及構(gòu)建的最佳轉(zhuǎn)化體系實(shí)現(xiàn)了外消旋丁基苯酞的高效拆分。 用GC-MS和NMR鑒定了外消旋丁基苯酞的結(jié)構(gòu)和純度，并用手性液相色譜制備了丁基苯酞的單一對映體標(biāo)樣和建立了適合檢測丁基苯酞的方法。丁基苯酞具體的檢測方法為：樣品通過手性固定相高效液相色譜進(jìn)行分析，條件為ChiralcelOD-H柱，流動相為正己烷/異丙醇(98：2)

2、，流速0.5ml/min，檢測波長為256nm。 理論設(shè)計上考慮了15個拆分方案，但實(shí)際上只有三種實(shí)際上可行，即：外消旋丁基苯酞的對映體選擇性酸解、以烯酯為?；w的丁基苯酞的轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)和以乙酸酐為?；w的?；磻?yīng)，反應(yīng)介質(zhì)為有機(jī)溶劑。 對于Novozyme435催化的外消旋丁基苯酞的對映體選擇性酸解反應(yīng)，研究了有機(jī)溶劑性質(zhì)參數(shù)、水活度、丁基苯酞濃度、乙酸與丁基苯酞的摩爾比、加酶量、轉(zhuǎn)速和轉(zhuǎn)化時間對反應(yīng)的影響。酸解反應(yīng)

3、的最適條件為：溶劑為正己烷，水活度0.54，丁基苯酞濃度0.5％(v/v)，乙酸與丁基苯酞的摩爾比10：1，酶濃度8mg/mL，轉(zhuǎn)速150r/min，轉(zhuǎn)化時間64小時。在此反應(yīng)條件下，丁基苯酞的轉(zhuǎn)化率為14.7％。 對于Novozyme435催化的分別以乙酸乙烯酯為?；w的外消旋丁基苯酞的對映體選擇性轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)和乙酸酐為?；w的外消旋丁基苯酞的對映體選擇性酰化反應(yīng)，研究了單溶劑、二元混和溶劑、含水量、丁基苯酞濃度、?；w與

4、丁基苯酞摩爾比、酶濃度、轉(zhuǎn)速和轉(zhuǎn)化時間對反應(yīng)的影響。構(gòu)建了最適的二元反應(yīng)介質(zhì)：65％(mol/mol)的四氫呋喃和35％(mol/mol)的正己烷。其它最適反應(yīng)條件為：25.0mM丁基苯酞，0.4％(v/v)水，0.2M乙酸乙烯酯(或乙酸酐)和8mg/mLNovozyme435，反應(yīng)混合物在30℃的搖床上150r/min反應(yīng)40h(以乙酸酐為?；w時，48h)。反應(yīng)后，對于轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)，丁基苯酞的轉(zhuǎn)化率和ee值可分別達(dá)到49.2％和96

5、.8％；對于酰化反應(yīng)，丁基苯酞的轉(zhuǎn)化率和ee值可分別達(dá)到49.0％和95.7％。 水在Novozyme435催化的外消旋丁基苯酞的拆分反應(yīng)中起著關(guān)鍵性的作用。在研究中分別用不同的控制體系中水含量的方法對Novozyme435催化的外消旋丁基苯酞的對映體選擇性酸解、外消旋丁基苯酞的對映體選擇性轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)和外消旋丁基苯酞的對映體選擇性酰化反應(yīng)。結(jié)果表明水合鹽(飽和鹽溶液)預(yù)平衡法控制水含量適合于外消旋丁基苯酞的對映體選擇性酸解，向體