富亮氨酸膠質(zhì)瘤失活基因1（leucine-rich glioma inactivated gene-1，LGI-1）的作用研究.pdf

1、目的檢測(cè)人腦膠質(zhì)瘤組織中及膠質(zhì)瘤細(xì)胞系富亮氨酸膠質(zhì)瘤失活基因1(LGI1)有無微衛(wèi)星雜合性缺失(LOH)及構(gòu)建LGI1質(zhì)粒(pcDNA3.1/LGI1)，研究該基因與膠質(zhì)瘤的關(guān)系。 材料與方法1.收集天津市環(huán)湖醫(yī)院、天津市第一中心醫(yī)院神經(jīng)外科手術(shù)切除的新鮮膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本25例，同時(shí)收集每例患者的血標(biāo)本。另外收集腦外傷減壓術(shù)中切除的腦組織1例，用作對(duì)照。另外還選擇5種膠質(zhì)瘤細(xì)胞系(C6、TJ905、A172、U251、H4)用于體

2、外實(shí)驗(yàn)研究。 2.提取組織標(biāo)本、血細(xì)胞及體外培養(yǎng)細(xì)胞系的基因組DNA。參照文獻(xiàn)設(shè)計(jì)并合成特異性引物，擴(kuò)增LGI1微衛(wèi)星序列，凝膠電泳銀染分析，如發(fā)現(xiàn)異常泳動(dòng)條帶，則進(jìn)行DNA測(cè)序。采用原位雜交和免疫組化技術(shù)檢測(cè)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U251、A172有無內(nèi)源性LGI1基因表達(dá)異常。 3.構(gòu)建pcDNA3.1/LGI1，采用脂質(zhì)體介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)染LGI1表達(dá)缺失的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172，用RT-PCR和免疫組化方法對(duì)被轉(zhuǎn)染細(xì)胞LGI1的

3、mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)定MTT吸收值以觀察被轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖活性變化，AnnevinV-FITC法檢測(cè)被轉(zhuǎn)染細(xì)胞的凋亡狀態(tài)。 結(jié)果在25例膠質(zhì)瘤標(biāo)本及5種細(xì)胞系中均未檢測(cè)到LOH。A172未見內(nèi)源性1LGI1基因表達(dá)。pcDNA3.1/LGI1可通過脂質(zhì)體介導(dǎo)作用成功的被轉(zhuǎn)染到A172細(xì)胞內(nèi)。用pcDNA3.1/LGI1轉(zhuǎn)染膠質(zhì)瘤細(xì)胞系A(chǔ)172后，可引起：①實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖活性受到抑制，MTT吸收值在轉(zhuǎn)染后24小時(shí)和