大鼠頜下腺細(xì)胞與透明質(zhì)酸修飾的絲素-殼聚糖支架體外復(fù)合培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 研究透明質(zhì)酸修飾的絲素-殼聚糖(Silkfibmin-Chitosan/Hyaluronicacid,SF-CS/HA)支架對(duì)大鼠頜下腺細(xì)胞(Rat submandibular gland cells,RSMG-cells)黏附、增殖及分泌的影響。
　　 方法：
　　 使用凍干法制備殼聚糖(Chitosan,CS)支架、絲素-殼聚糖(Silkfibroin-Chitosan,SF-CS)支架以及透明

2、質(zhì)酸修飾的絲素-殼聚糖(Silkfibroin-Chitosan/Hyaluronicacid,SF-CS/HA)支架。組織塊法原代培養(yǎng)3d齡的大鼠頜下腺細(xì)胞,將純化的大鼠頜下腺細(xì)胞分別與CS支架、SF-CS支架、和SF-CS/HA支架共同培養(yǎng),免疫組化鑒定細(xì)胞來源,采用掃描電鏡、Hoechst染色熒光顯微鏡下觀察頜下腺細(xì)胞與支架的附著情況,檢測(cè)各組中細(xì)胞上清液中唾液淀粉酶含量的差異,應(yīng)用MTT法對(duì)比三種支架對(duì)細(xì)胞增殖的影響。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)

3、據(jù)應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理,計(jì)量資料用(-x±s)表示,組間差異比較采用單因素方差分析,以α=0.05,P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 掃描電鏡觀察SF/CS-HA支架:支架為多孔三維結(jié)構(gòu),孔隙大小在100-200μm之間。第7天時(shí)可見頜下腺細(xì)胞伸展在SF/CS-HA支架中的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)內(nèi),黏附的細(xì)胞伸出足突,細(xì)胞間有微絨毛相聯(lián)系,細(xì)胞表面有許多分泌顆粒和絲狀纖維。大鼠頜下腺細(xì)胞與SF-CS

4、/HA支架復(fù)合培養(yǎng)1h后開始附著于支架上,4h附著率達(dá)70%,8h達(dá)90%以上,24h時(shí)有95%左右的頜下腺細(xì)胞粘附。而在SF-CS組和CS組,黏附率在各個(gè)時(shí)間段上與SF-CS/HA組差異明顯,黏附速率要顯著慢于SF-CS/HA組。Hoechst熒光染色觀察到相對(duì)于SF-CS組和CS組,細(xì)胞在SF-CS/HA組中不僅黏附數(shù)量要多于SF-CS組和CS組,并且細(xì)胞間聯(lián)系和細(xì)胞活力更加良好。通過MTT法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)大鼠頜下腺細(xì)胞與SF-CS/HA

5、支架復(fù)合培養(yǎng)5d、7d后增殖迅速,而11d、13d和15d細(xì)胞幾乎沒有增殖。SF-CS/HA組的細(xì)胞在7d、9d和10d增殖速度要比SF-CS和CS組更為顯著(p＜0.01,n=3)。細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的淀粉酶分泌量隨著培養(yǎng)時(shí)間有不同程度的增加,SF-CS/HA組在3d、5d、7d、9d唾液淀粉酶濃度與SF-CS組和SF組相比有明顯差異(p＜0.001,n=3)。
　　 結(jié)論：
　　 與CS支架、SF-CS支架相比,大鼠頜