糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角細(xì)胞凋亡及相關(guān)蛋白表達(dá)的變化.pdf

1、目的:通過(guò)注射Streptozocin制備糖尿病大鼠模型，判斷出現(xiàn)疼痛異常癥狀即糖尿病周圍神經(jīng)病變后，不同時(shí)間點(diǎn)觀察脊髓背角神經(jīng)細(xì)胞的凋亡變化及特異性標(biāo)志蛋白，膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）和Caspase-3的改變，分析其變化規(guī)律，為認(rèn)識(shí)神經(jīng)病理性疼痛(Diabetic neuropathy pain，DNP)發(fā)病機(jī)理及臨床治療提供幫助。
　　 方法:健康成年雄性S

2、D大鼠100只，6周齡，體重150g～170g，禁食12小時(shí)后，隨機(jī)選擇30只大鼠作為正常對(duì)照組，另70只大鼠腹腔注射Streptozocin(STZ，50mg/kg)，制備糖尿病大鼠模型，注射STZ一周以后，采尾靜脈血測(cè)試隨機(jī)血糖，隨機(jī)血糖＞16.7mmmol/L的大鼠，為糖尿病造模成功大鼠。兩周后，采用Von frey Hairs法測(cè)定糖尿病大鼠的機(jī)械刺激縮足閾值(paw withdrawal threshold，PWT)，將PWT

3、小于4g的大鼠作為糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠(DNP)進(jìn)行研究。對(duì)照組30只大鼠用同等體積的生理鹽水代替STZ腹腔注射。分別于注射STZ后4、6、8周每組各選10只大鼠，腹腔注射1％戊巴比妥納40mg/kg麻醉后，解剖大鼠，取L1-5節(jié)段脊髓組織。用原位末端標(biāo)記法（TUNEL）對(duì)凋亡細(xì)胞染色計(jì)數(shù)觀察，同時(shí)用免疫組化方法對(duì)GFAP染色和Caspase-3蛋白表達(dá)水平的變化進(jìn)行觀察，通過(guò)與對(duì)照組動(dòng)物比較和不同時(shí)間點(diǎn)的觀測(cè)指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，揭示

4、糖尿病神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角神經(jīng)細(xì)胞凋亡變化過(guò)程及特異性標(biāo)志蛋白GFAP的表達(dá)變化規(guī)律。
　　 結(jié)果:
　　 1應(yīng)用STZ腹腔注射法造模的大鼠，一周后70只大鼠中有52只糖尿病造模成功（占75％）。造模成功的糖尿病大鼠經(jīng)Von frey hairs法篩選出的30只糖尿病性疼痛大鼠，與對(duì)照組大鼠比較，4、6、8周時(shí)隨機(jī)血糖顯著升高(P＜0.05)、縮足反應(yīng)閾值顯著降低(P＜0.05)。
　　 2 TUNNEL染

5、色觀察脊髓背角神經(jīng)元凋亡變化，與對(duì)照組相比較，模型組大鼠凋亡細(xì)胞數(shù)量在4、6、8周時(shí)均顯著增多（P＜0.05），并且在觀察點(diǎn)內(nèi)，隨時(shí)間延長(zhǎng)凋亡細(xì)胞數(shù)目呈逐漸增多的變化趨勢(shì)。
　　 3脊髓背角GFAP表達(dá)變化:與對(duì)照組相比較，第4、6、8周模型組大鼠脊髓背角細(xì)胞GFAP平均光密度值顯著升高（P＜0.05），并隨時(shí)間延長(zhǎng)，有表達(dá)增高的趨勢(shì)。
　　 4脊髓背角Caspase-3表達(dá)水平觀察:與對(duì)照組相比，模型組4、6、8周時(shí)c