茵梔黃注射液基于FXR通路治療肝內膽汁淤積的機制研究.pdf

1、研究背景:
　　肝內膽汁淤積屬于“黃疸”，臨床上陽黃證較為常見。疏肝利膽退黃法為辨病論治的基本治療法則，茵陳蒿湯為治療陽黃的代表性方劑，茵梔黃注射液源于茵陳蒿湯。肝內膽汁淤積的發(fā)病率高，國內外診斷標準不統(tǒng)一，UDCA、SAMe、甘草酸類制劑是治療IHC的一線藥物，UDCA作用機制尚不明確，SAMe長期臨床療效和作用機制還有待進一步研究，經濟效應也有待考慮。目前主流研究認為膽汁酸代謝的主要通路是FXR通路，F(xiàn)XR通路調控的成熟方法是

2、利用GW4064和siRNA調控。目前關于茵梔黃注射液治療黃疸的研究大多將FXR及下游基因等膜轉運體作為同一層次的指標，忽略了FXR是上游受體，BSEP、MDR3、MRP2、OATP2是下游靶基因的關系，對這兩個層次的相關性中醫(yī)藥研究不多。
　　目的:
　　通過研究疏肝利膽退黃法的代表藥性藥物茵梔黃注射液對HL-7702的FXR、BSEP、MDR3、MRP2、OATP2基因表達的影響，探討茵梔黃注射液治療肝內膽汁淤積的作用機

3、制。
　　方法:
　　采用CCK8法探索不同濃度的YZH對HL-7702的活性影響，評價藥物對細胞的毒性作用，確定最佳YZH干預的最佳濃度和最佳作用時間;用GW4064和siRNA調控FXR基因的表達，采用反轉錄實時熒光定量PCR法，2-ΔΔCt法研究目的基因mRNA的相對表達量;采用蛋白質免疫印跡法研究目的基因蛋白質的相對表達量;采用免疫熒光法對FXR、BSEP、MRP2蛋白定位和定性研究。
　　結果:
　　研

4、究結果表明YZH對HL-7702的理想干預濃度1.08％(95％置信區(qū)間:0.89％～1.30％)，理想干預時間為15.47h(95％置信區(qū)間:12.92～18.54)。研究結果表明YZH對HL-7702活性的抑制作用與劑量正相關。YZH促進FXR基因的表達(P＜0.01); YZH促進MDR3基因的表達(P＜0.01); YZH抑制OATP2基因的表達(P＜0.01)。0.6％YZH促進BSEP基因的表達(P＜0.05)，1.2％YZ

5、H抑制BSEP基因的表達(P＜0.01);未下調FXR基因時，YZH抑制MRP2基因的表達。下調FXR基因后，YZH促進MRP2基因的表達(P＜0.01)。
　　結論:
　　肝內膽汁淤積屬于“黃疸”，臨床上陽黃證較為常見。疏肝利膽退黃法為辨病論治的基本治療法則，茵陳蒿湯為治療陽黃的代表性方劑，茵梔黃注射液源于茵陳蒿湯。YZH對HL-7702的理想干預濃度為1.08％，理想干預時間為15.47h，YZH對HL-7702活性的抑