肝移植急性排斥反應(yīng)炎性體相關(guān)分子表達(dá)的研究.pdf

1、肝移植已成為治療終末肝臟疾病最有效的方法之一，肝移植術(shù)后的排斥反應(yīng)仍是亟待解決的難題。排斥反應(yīng)主要表現(xiàn)之一為炎癥反應(yīng)，炎性細(xì)胞分泌的炎癥因子如白細(xì)胞介素(Interleukin，IL)-1，IL-2，IL-4，IL-6，IL-10,IFN-γ(Interferon-γ)等通過增加血管通透性、增強(qiáng)白細(xì)胞粘附作用和浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞損傷破壞正常組織等炎癥效應(yīng)在排斥反應(yīng)中起著重要的作用。
　　 炎性體是細(xì)胞質(zhì)中由NOD樣受體、接頭蛋白AS

2、C(apoptosis-associatedspeck-likeproteincontainingacaspaserecruitmentdomain)和半胱天冬酶-1(Caspase-1)組成的大分子復(fù)合物。炎性體能夠激活caspase-1，活化的caspase-1能夠酶切IL-1β和IL-18前體分子而生成具有生物學(xué)活性的IL-1β和IL-18，參與炎癥反應(yīng)等生物學(xué)效應(yīng)。
　　 近年來有關(guān)炎性體在疾病中作用的研究取得很大進(jìn)展，

3、研究表明炎性體與慢性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病的發(fā)生密切相關(guān)。炎性體在器官移植排斥反應(yīng)中的作用也逐漸受到重視，研究發(fā)現(xiàn)炎性體相關(guān)基因的表型可以作為干細(xì)胞移植后臨床結(jié)果的重要診斷指標(biāo)，小鼠心臟移植術(shù)后的急性排斥反應(yīng)發(fā)生時(shí)炎性體相關(guān)分子表達(dá)升高，同時(shí)有研究證實(shí)炎性體與肝臟的缺血再灌注損傷有關(guān)。
　　 為研究炎性體及其相關(guān)分子在肝移植排斥發(fā)生發(fā)展中的作用及其分子機(jī)制，并為移植排斥反應(yīng)的防治提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)采用

4、雙套管法建立大鼠肝移植模型45例，分成同基因(Lewis-Lewis)組、異基因(DA-Lewis)組和caspase-1的不可逆抑制劑Ac-YVAD-CMK(10mg/kg)處理異基因組，在移植后1天、3天、7天(n=5)用組織病理切片H&E染色以及Banff排斥評(píng)分觀察移植排斥程度，采用免疫組化檢測(cè)移植物中ASC和IL-1β的表達(dá)，熒光定量PCR檢測(cè)移植物中ASC、IL-1β和IFN-γmRNA水平的表達(dá)，ELISA檢測(cè)術(shù)后血清IL

5、-1β的表達(dá)，研究肝移植急性排斥反應(yīng)中炎性體相關(guān)分子的表達(dá)及其相互關(guān)系。
　　 結(jié)果表明，(1)與同基因移植組比較，異基因移植組的炎癥反應(yīng)隨術(shù)后時(shí)間延長(zhǎng)而加劇，血管周圍炎性細(xì)胞數(shù)量增加，并浸潤(rùn)肝實(shí)質(zhì)，出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞變性壞死；Ac-YVAD-CMK處理組有一定改善。Banff評(píng)分結(jié)果表明術(shù)后備時(shí)間點(diǎn)同基因組的排斥活動(dòng)指數(shù)(RAI，rejection-activeindex)均極顯著低于異基因組(p<0.01)，并且持續(xù)處于較低水

6、平，異基因組的RAI隨時(shí)間增加明顯升高(p<0.01)，Ac-YVAD-CMK處理組顯著低于異基因組(p<0.05)，表明抑制炎性體的活化能在一定程度上抑制移植排斥反應(yīng)。(2)免疫組化顯示，與同基因組比較，異基因組ASC和IL-1β的表達(dá)量隨著排斥反應(yīng)的進(jìn)展而增加，并且呈現(xiàn)顯著的相關(guān)性，ASC主要分布在血管周圍炎性細(xì)胞的胞質(zhì)中，IL-1β分布在血管周圍肝細(xì)胞的間隙，Ac-YVAD-CMK處理組的表達(dá)量與同基因組類似。(3)定量PCR結(jié)果

7、顯示，與同基因組和Ac-YVAD-CMK處理組比較，異基因組ASC和IL-1βmRNA表達(dá)顯著上調(diào)(p<0.05)，且呈一定的相關(guān)性；IFN-γ的mRNA表達(dá)水平在移植后第3天達(dá)到最高值。(4)ELISA結(jié)果表明，與同基因組比較，異基因組移植后7天血清中IL-1β的表達(dá)水平顯著增高(p<0.05)，Ac-YVAD-CMK處理組表達(dá)與同基因組類似，提示炎性體活化與肝移植排斥反應(yīng)密切相關(guān)。
　　 我們的研究發(fā)現(xiàn)，肝移植后移植物ASC