吡那地爾預(yù)處理對內(nèi)毒素血癥保護(hù)效應(yīng)及其機理的實驗研究.pdf

1、該實驗首次用可模擬缺血預(yù)適應(yīng)的Pinacidil預(yù)處理動物及細(xì)胞,觀察對內(nèi)毒素血癥的預(yù)保護(hù)作用及其作用機理.首先該課題在驗證Pinacidil對內(nèi)毒素血癥有無預(yù)保護(hù)作用的基礎(chǔ)上,以K<,ATP>通道關(guān)閉劑Glyburide為工具藥,針對內(nèi)毒素血癥致死的主要機制,觀察Pinacidil預(yù)處理對內(nèi)毒素血癥時血液凝血機制的影響,對內(nèi)毒素血癥細(xì)胞因子產(chǎn)生及其信號轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控機制的作用,以及在Pinacidil預(yù)處理后對中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)的影響,主要

2、的結(jié)果及結(jié)論如下:1.Pinacidil預(yù)處理后內(nèi)毒素血癥小鼠生存率明顯增加,Glyburide可以拮抗Pinacidil的作用,使生存率與未治療組相差不明顯.2.用沉淀法對大鼠血液凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ及纖維蛋白原含量研究發(fā)現(xiàn),Pinacidil預(yù)處理可使內(nèi)毒素血癥時凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ減少滯后,在各時相點均使纖維蛋白原量明顯高于LPS組,Glyburide對Pinacidil有明顯的拮抗作用. 3.用ELISA法檢測大鼠血液細(xì)胞因

3、子TNF-α、IL-6含量顯示,Pinacidil預(yù)處理使內(nèi)毒素血癥TNF-α、IL-6含量明顯降低;在用LPS攻擊人單核細(xì)胞株THP-1時也發(fā)現(xiàn),Pinacidil預(yù)處理可使THP-1生成TNF-α、IL-6明顯減少,Glyburide對Pinacidil預(yù)處理有明顯的拮抗作用,表明Pinacidil預(yù)處理使SIRS反應(yīng)中單核/巨噬細(xì)胞生成細(xì)胞因子TNF-α、IL-6減少,繼而降低血液中TNF-α、IL-6含量,減輕SIRS反應(yīng). 4

4、.該文用流式細(xì)胞儀研究THP-1細(xì)胞膜表面抗體標(biāo)記的TLR4時發(fā)現(xiàn),在LPS的攻擊下,LPS跨膜受體TLR4的表達(dá)呈可誘導(dǎo)性表達(dá);我們首次發(fā)現(xiàn)在不同濃度的LPS刺激下,Pinacidil預(yù)處理使THP-1細(xì)胞膜表面TLR4表達(dá)量明顯降低;在用ELISA法研究核內(nèi)NF-κB(p65)表達(dá)量時也顯示,Pinacidil預(yù)處理使不同濃度LPS刺激后NF-κB(p65)表達(dá)量降低,Glyturide對以上反應(yīng)均有拮抗作用.5.在研究中性粒細(xì)胞呼

5、吸爆發(fā)和細(xì)胞內(nèi)[Ca<'2+>]變化時結(jié)果顯示,Pinacidil預(yù)處理使LPS攻擊后胞內(nèi)游離[Ca<'2+>]升高程度明顯降低,并使中性粒細(xì)胞在PMA刺激下呼吸爆發(fā)明顯減弱,Glyburide明顯拮抗Pinacidil預(yù)處理的作用.因此Pinacidil預(yù)處理可抑制中性粒細(xì)胞呼吸爆發(fā)作用,減少氧自由基生成,減輕對器官和細(xì)胞的損傷. 綜上所述,Pinacidil預(yù)處理對內(nèi)毒素血癥具有藥理性預(yù)適應(yīng)效應(yīng),其作用機理為減輕LPS導(dǎo)致的凝血功能