過表達(dá)CXCL16的轉(zhuǎn)基因小鼠血清MCP-1和ICAM-1水平的變化.pdf

1、背景：動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)是嚴(yán)重威脅人類健康的一大類疾病，隨著我國(guó)人民生活水平提高和飲食習(xí)慣改變，該病成為我國(guó)主要死亡原因。隨著研究的深入，研究者們逐漸認(rèn)識(shí)到炎癥反應(yīng)在 AS發(fā)生機(jī)制中的重要性。CXC趨化因子配體16(CXC chemokine ligand16，CXCL16)屬于趨化因子CXC亞家族，通過與G蛋白偶聯(lián)受體相互作用可以誘導(dǎo)多種類型白細(xì)胞定向遷移，參與AS病變的炎癥反應(yīng)。在 AS病變、風(fēng)濕性

2、心瓣膜疾病及感染性心內(nèi)膜炎等疾病中，CXCL16表達(dá)于巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞。除趨化作用外CXCL16還促進(jìn)平滑肌的增殖、炎癥細(xì)胞粘附，并可作為清道夫受體促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)形成泡沫細(xì)胞。此外，最近的研究顯示 CXCL16還有促進(jìn)血管生成等與AS形成相關(guān)的作用。我們之前的實(shí)驗(yàn)采用轉(zhuǎn)基因方法已構(gòu)建了過表達(dá)CXCL16小鼠模型，并給出了CXCL16具有促進(jìn)AS的證據(jù)，包括其升高血脂濃度，上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達(dá)和促AS發(fā)生的病

3、理學(xué)結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)在原有工作的基礎(chǔ)上完善了對(duì)轉(zhuǎn)基因小鼠體內(nèi) CXCL16過表達(dá)的驗(yàn)證，并觀察轉(zhuǎn)基因小鼠中單核細(xì)胞趨化性蛋白1（Monocyte chemotactic proteins-1,MCP-1）、細(xì)胞間粘附因子-1（Intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）這兩個(gè)對(duì)AS有較為明確影響的炎癥因子的表達(dá)變化。
　　目的：1.觀察轉(zhuǎn)基因小鼠血清及其主動(dòng)脈壁處CXCL16的表達(dá)情況。
　

4、　2.觀察CXCL16過表達(dá)對(duì)AS中重要炎癥因子MCP-1、ICAM-1的影響。
　　方法：通過顯微注射構(gòu)建的CXCL16轉(zhuǎn)基因小鼠為雜合子，行PCR篩選陽性后代合籠配種，反復(fù)多次形成 CXCL16轉(zhuǎn)基因純合子小鼠。所有小鼠先以普通飼料喂養(yǎng)，2周后隨機(jī)挑選20只CXCL16轉(zhuǎn)基因純合子小鼠作為轉(zhuǎn)基因組，隨機(jī)挑選20只C57BL/6J純系小鼠作為純系組，每組內(nèi)隨機(jī)挑選10只飼以高脂飼料16周，另10只始終給予普通飼料。實(shí)驗(yàn)分組：（1

5、）高脂轉(zhuǎn)基因組（2）高脂純系組（3）普食轉(zhuǎn)基因組（4）普食純系組。18周后實(shí)時(shí)熒光定量 RT-PCR檢測(cè)主動(dòng)脈壁CXCL16mRNA含量；測(cè)量小鼠血脂水平；使用ELISA檢測(cè)小鼠血清MCP-1、ICAM-1與CXCL16濃度；免疫組化分析主動(dòng)脈壁和主動(dòng)脈瓣MCP-1、ICAM-1的表達(dá)。
　　結(jié)果：1.高脂轉(zhuǎn)基因組小鼠的總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平均比普食轉(zhuǎn)基因組小鼠的相應(yīng)指標(biāo)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<

6、0.05）;高脂純系組小鼠的總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平均比普食純系組小鼠的相應(yīng)指標(biāo)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;高脂轉(zhuǎn)基因組小鼠的總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平均比高脂純系組小鼠的相應(yīng)指標(biāo)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.高脂轉(zhuǎn)基因組及普食轉(zhuǎn)基因組小鼠主動(dòng)脈 CXCL16mRNA的表達(dá)和血清CXCL16水平分別高于高脂純系組及普食純系組小鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、意義（P<0.05）;高脂轉(zhuǎn)基因組及高脂純系組小鼠主動(dòng)脈 CXCL16mRNA的表達(dá)和血清 CXCL16水平分別高于普食轉(zhuǎn)基因組及普食純系組小鼠，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.高脂轉(zhuǎn)基因小鼠血清 MCP-1水平較高脂純系組、普食轉(zhuǎn)基因組均明顯升高（P<0.01）。普食轉(zhuǎn)基因組與普食純系組間MCP-1血清水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高脂純系組與普食純系組間MCP-1的血清水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.高脂轉(zhuǎn)基因組及高脂純

8、系組血清 ICAM-1水平分別較普食轉(zhuǎn)基因組及普食純系組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；高脂轉(zhuǎn)基因組及普食轉(zhuǎn)基因組血清ICAM-1水平分別較高脂純系組及普食純系組明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.免疫組化發(fā)現(xiàn)高脂轉(zhuǎn)基因組小鼠主動(dòng)脈壁及主動(dòng)脈瓣區(qū)MCP-1與ICAM-1的表達(dá)高于高脂純系組。
　　結(jié)論：1、驗(yàn)證了CXCL16在轉(zhuǎn)基因模型中過表達(dá)；
　　2、CXCL16的過表達(dá)增加了高脂飲食小鼠MCP-1和