轉錄后基因沉默在煙草對PVY和CMV雙價抗性中的應用研究.pdf

1、煙草病毒病害是煙草上的主要病害,PVY和CMV均在我國煙草上廣泛分布,且多復合發(fā)生.對于病毒病的防治,抗病毒育種成為最經濟有效的防治手段.但是在傳統(tǒng)育種中存在抗病性與不良農藝性狀連鎖等問題,轉基岡生物技術為解決這一問題提供了一條可行性的路線.基因沉默現(xiàn)象是上世紀末被發(fā)現(xiàn)的,目前對其作用機制已有了比較詳細的認識,在植物抗病毒中的應用研究也已開展很多,已有的實驗數(shù)據(jù)表明,利用基因沉默技術可以獲得高抗乃至免疫水平的抗性,其在抗病育種中具有非常

2、廣闊的用前景. 本論文是利用轉錄后基因沉默技術進行的雙價病毒抗性轉基因煙草研究.在國內首次利用病毒抑制子PVY HP-Pro和CMV 2b的保守區(qū)段為靶標進行雙價病毒抗性的研究.根據(jù)GenBank中的數(shù)據(jù)確定靶標序列后,利用RT-PCR技術克隆了國內流行株系的PVY H4C-Pro片段和CMV 2b片段.將兩靶標序列串聯(lián)后以此為基礎進行載體構建,通過反向中間載體和正反向中間載體得到靶標串聯(lián)片段的反向重復序列結構,用其替換掉雙元表