雞傳染性支氣管炎病毒（重慶株）的分離鑒定及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(Avian Infectious Bronchitis，IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus,IBV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病。上世紀30年代在美國爆發(fā)以來，現(xiàn)在已經(jīng)成為世界各地流行的主要禽病。目前，我國IB的發(fā)生已經(jīng)遍布華北、西北、西南和東北等大部分省、市和自治區(qū)，雖然已廣泛使用IB疫苗，但IB仍然普遍存在，尤其是在已免疫雞群中又常常爆發(fā)IB，造成嚴重的經(jīng)濟損

2、失。 IBV是單股RNA病毒，該病毒基因可由于點突變和重組而發(fā)生變異，故此傳染性支氣管炎病毒的血清型較多，已達30余種之多。已知的以侵害呼吸道為主的血清型有Conn、 lowa97、JMK、Florida、Arkansas99等和以侵害腎臟為主的M41、Holte、Gray、Australia等血清型。 2006年4月，重慶某雞場在已經(jīng)進行了IB的常規(guī)免疫程序后，仍爆發(fā)了嚴重的疑似雞傳染性支氣管炎病。為了找出確切的病原，

3、我們對該致病病原進行了分離鑒定，并對其生物學(xué)特性進行了研究。 病原的分離與鑒定：無菌采集病死雞及瀕死雞嚴重病變腫大的腎臟制成懸液，菌檢陰性后按照常規(guī)實驗方法經(jīng)雞胚傳代，收集6代雞胚尿囊液，用1％的雞紅細胞進行血凝試驗檢驗是否含有新城疫病毒、流感病毒。結(jié)果表明，尿囊液無直接血凝性，用1％胰蛋白酶處理后出現(xiàn)血凝性。將6代雞胚尿囊液裝入透析袋埋入固體PEG6000中進行濃縮純化，經(jīng)過濾除菌，濾液即為濃縮純化的病原液。將濃縮純化的病原液

4、進一步經(jīng)致雞胚矮小化試驗、新城疫干擾試驗、動物回歸試驗和氣管環(huán)組織培養(yǎng)交叉中和試驗證實了分離到的病原為雞傳染性支氣管炎病毒。 IBV重慶株理化性質(zhì)的測定：通過半數(shù)雞胚感染量試驗測定EID<,50>為10<'-6.74>/mL；通過半數(shù)氣管環(huán)感染量試驗測得TOCID<,50>為10<'-4.52>/mL；氯仿敏感試驗表明重慶株對氯仿敏感；乙醚敏感試驗表明重慶株對乙醚敏感：熱穩(wěn)定試驗表明重慶株對熱敏感；酸堿敏感試驗表明pH3.0與p

5、H11.0的酸堿環(huán)境均可降低重慶株的毒力。用氣管環(huán)組織培養(yǎng)交叉中和試驗鑒定分離株的血清型，結(jié)果重慶株與標準T陽性血清有一定交叉反應(yīng)，中和效價為1∶32，與其他Mussachusetts、Arkansas、Connecticut．Gray等血清型中和效價均為0，表明重慶株是一株IBV變異毒株。 IBV重慶株S1基因的克隆測序分析：提取IBV重慶株的RNA，對其S1基因應(yīng)用RT-PCR方法進行了克隆與測序，使用DNAStar軟件進行序列分析