水稻AP2-EREBP類轉(zhuǎn)錄因子基因的功能研究.pdf

1、適宜的環(huán)境條件能保證或促進(jìn)植物正常的生長發(fā)育，而不適宜的或惡劣的環(huán)境條件則會(huì)抑制植物的生長甚至使植物死亡。干旱、低溫和高鹽是目前影響農(nóng)作物的主要非生物限制因子，它對(duì)作物的危害通常表現(xiàn)為植物體內(nèi)的水分平衡的變化，又稱水分脅迫或滲透脅迫。 DREB轉(zhuǎn)錄因子即干旱應(yīng)答元件結(jié)合蛋白，可以特異的與DRE順式作用元件結(jié)合，在非生物逆境脅迫(干旱、低溫、高鹽)中誘導(dǎo)表達(dá)并激活相關(guān)抗逆功能基因的表達(dá)，從而使植物能夠耐受水分脅迫的影響。

2、本研究通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻轉(zhuǎn)化方法，將通過酵母單雜交方法從水稻獲得的轉(zhuǎn)錄因子RdreB1基因轉(zhuǎn)入水稻，得到陽性轉(zhuǎn)基因植株。生理功能分析表明轉(zhuǎn)基因水稻中RdreB1基因的過量表達(dá)明顯提高了水稻對(duì)低溫脅迫的耐受性。 同時(shí)對(duì)另一水稻轉(zhuǎn)錄因子OsAP22基因進(jìn)行研究，網(wǎng)上同源序列比對(duì)結(jié)果表明，該轉(zhuǎn)錄因子編碼的蛋白含有一個(gè)高度保守的AP2/EREBP結(jié)構(gòu)域，N端為核定位信號(hào)(NLS)，而C端則可能是一個(gè)轉(zhuǎn)錄的激活區(qū)域，屬于AP2/EREB

3、P類轉(zhuǎn)錄因子。生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系分析表明OsAP22與DREB2亞類轉(zhuǎn)錄因子具有較高的親緣關(guān)系，可能屬于DREB亞家族。 對(duì)各種逆境處理和不同組織的水稻進(jìn)行RT-PCR分析，結(jié)果表明OsAP22在干旱和高鹽的脅迫誘導(dǎo)下存在過量表達(dá)。通過農(nóng)桿菌蘸花法將OsAP22基因轉(zhuǎn)入擬南芥，經(jīng)潮霉素篩選、GUS活性檢測(cè)和PCR檢測(cè)驗(yàn)證獲得轉(zhuǎn)基因陽性植株，轉(zhuǎn)基因陽性植株的干旱和鹽漬生理實(shí)驗(yàn)表明，與非轉(zhuǎn)基因的植株相比，大部分轉(zhuǎn)基因陽性植