水稻MYB家族轉錄因子OsMYB2的功能研究.pdf

1、轉錄調控是植物生長發(fā)育、逆境反應、信號轉導、抗病性等一系列基因表達的最主要調控形式，轉錄因子是參與基因轉錄水平調控過程的重要因子。MYB轉錄因子是植物轉錄因子中最大的家族之一，可以特異的識別結合基因啟動子中的MYB順式作用元件，調控與生物或非生物逆境相關的一系列基因表達。 本研究對水稻轉錄因子OsMYB2進行研究，對OsMYB2 cDNA的氨基酸序列與其他植物中已知的MYB家族的蛋白進行對比，結果表明該轉錄因子具有一個非常保守的

2、R2R3MYB結構域。序列分析顯示OsMYB2在N端保守域包含兩個不完全的色氨酸重復，色氨酸重復區(qū)域形成螺旋一轉角一螺旋的DNA結合域，還含有一個潛在的ATP-GTP結合位點，一個對氧化還原反應敏感的半胱氨酸，和一個核定位序列。 對水稻進行各種逆境處理和提取不同組織的RNA，將其反轉錄為cDNA進行RT-PCR分析。結果是OsMYB2受干旱(PEG)、鹽(200mM NaCl)和ABA(200μM)處理誘導，但不受低溫誘導。組織

3、表達特異性檢測表明，OsMYB2在根、莖、葉、開花期穗、灌漿期穗均有表達，但是在根中的轉錄水平最高。 為了深入了解所克隆的水稻OsMYB2基因的生理功能及與非生物逆境應答的關系，構建了OsMYB2基因的植物表達載體，通過農桿菌蘸花法轉化擬南芥，經潮霉素篩選、GUS活性檢測和PCR檢測驗證篩選到轉基因陽性植株。生理功能分析表明，與野生型相比，轉基因株系對ABA表現出超敏，對逆境的反應表現更弱，但是對糖的反應表現更強。同時，對OsM

4、YB2可能調控的下游基因進行了表達譜分析，結果是RD22和RD29A的表達被下調，而ADH的表達被上調。 MYB轉錄因子能特異的與MYB順式元件相結合。本文選擇SV40的增強子中的一段MYB順式元件TAACTG來構建酵母魚餌質粒，利用酵母單雜交方法，對OsMYB2識別結合MYB元件的特異性進行了研究。結果表明，OsMYB2與MYB元件能特異結合，且結合后導致下游報告基因表達量減少，推測此基因為轉錄抑制子，在基因表達中起負調控的作