糖皮質(zhì)激素對股骨頭內(nèi)微血管內(nèi)皮細胞損傷的機制探討.pdf

1、目的:研究經(jīng)糖皮質(zhì)激素處理的骨微循環(huán)內(nèi)皮細胞內(nèi)活性氧(reactiveoxygen species,ROS)代謝過程的變化情況,以及維生素C對該過程的影響。骨壞死周圍組織中ROS及線粒體DNA(mtDNA)的突變情況。
　　 方法:應(yīng)用經(jīng)關(guān)節(jié)置換術(shù)切除的無疾病的股骨頸骨折患者的新鮮股骨頭標本,取出股骨頭內(nèi)的松質(zhì)骨,采用酶消化法,分離并培養(yǎng)股骨頭內(nèi)微循環(huán)內(nèi)皮細胞,倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。取第3代細胞,分別加入含不同濃度(0mg/

2、ml、0.03mg/ml、0.1mg/ml、0.3mg/ml、1.0mg/ml)氫化可的松的M199培養(yǎng)基,采用MTT方法測定細胞增殖抑制率；流式細胞儀觀測細胞凋亡率；使用熒光探針檢測細胞中活性氧濃度的變化；以及與活性氧代謝相關(guān)酶黃嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)的活性變化；培養(yǎng)基中加入維生素C(0.1mg/ml)進行干預,采用MTT法測定細胞增殖抑制率,并檢測細胞中活性氧濃度的變化。觀察骨壞死周圍組織中ROS濃度

3、,使用PCR法擴增mtDNA的D-Loop區(qū)并測序。
　　 結(jié)果:原代培養(yǎng)2～3 d后,鏡下見單個細胞為梭形,呈鋪路石樣排列,1周后細胞趨于融合狀態(tài)。內(nèi)皮細胞生長抑制率:不同濃度(0.03mg/ml、0.1mg/ml、0.3mg/ml、1.0mg/ml)下的內(nèi)皮細胞生長抑制率分別為(20.22％±2.97％)、(22.94％±4.52％)、(43.98％±3.35％)、(78.29％±3.85％),高濃度組顯著高于低濃度組(P<

4、0.05)。內(nèi)皮細胞凋亡率:不同濃度組的內(nèi)皮細胞凋亡率分別為(0.10％±0.01％)、(0.23％±0.02％)、(1.83％±0.04％)、(6.34％±0.11％)、(15.33％±0.53％),高濃度組的凋亡率高于低濃度組(P<0.05)。ROS值:不同濃度組分別為(57.35±7.11)、(120.47±15.68)、(166.15±11.57),糖皮質(zhì)激素處理后的ROS值顯著高于對照組,且高濃度組高于低濃度組(P<0.05)

5、。XOD值:不同濃度組的XOD值分別為(0.0179±0.0009)、(0.0283±0.0017)、(0.0677±0.0041),糖皮質(zhì)激素處理后的XOD值顯著高于對照組,且高濃度組與低濃度組有顯著差異(P<0.05)。與糖皮質(zhì)激素組相比,經(jīng)維生素C干預后,內(nèi)皮細胞生長抑制率明顯降低(P<0.05),且活性氧的生成減少(P<0.05)。骨壞死周圍組織中mtDNA的突變情況、ROS濃度均高于正常組織(P<0.05)。
　　 結(jié)