超聲聯(lián)合微泡開(kāi)放血-前列腺屏障的研究.pdf

1、前列腺疾病是男性臨床男性的多發(fā)病，發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)。據(jù)報(bào)道，50歲以上的男性人群中，約70％男性患有各種前列腺疾病，包括前列腺炎、前列腺增生及前列腺癌。臨床實(shí)踐及科學(xué)研究均提示前列腺組織具有一定的生物屏障結(jié)構(gòu)，一方面隔絕外來(lái)有害物質(zhì)對(duì)前列腺的損害，另一方面，也阻擋了藥物進(jìn)入前列腺組織。 目前認(rèn)為，前列腺腺體組織的纖維肌性間質(zhì)層、腺泡上皮脂質(zhì)層等構(gòu)成了前列腺的屏障結(jié)構(gòu)，加之血管分布在前列腺纖維間質(zhì)外側(cè)的特殊解剖結(jié)構(gòu)，藥物難以

2、通過(guò)此屏障達(dá)到治療前列腺疾病的有效濃度。在慢性前列腺炎的情況下，由于前列腺囊胞周?chē)w維化、膿腔周?chē)M織纖維化及纖維間質(zhì)明顯增生，其屏障作用更為突出。在藥物選擇上，水溶性、酸性、解離常數(shù)低及蛋白結(jié)合率高的抗菌藥物均不易透過(guò)血一前列腺屏障，因此在前列腺疾病的用藥上受到很大的限制，且療效欠佳，給龐大的患者人群和公共衛(wèi)生事業(yè)造成了極大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，如何提高前列腺組織通透性，探索新的藥物治療途徑是目前前列腺疾病治療的研究重點(diǎn)。 研究目

3、的： 1、采用第三軍醫(yī)大學(xué)附屬新橋醫(yī)院超聲科自行研發(fā)的新型脈沖式超聲治療儀，應(yīng)用單純微泡、單純超聲輻照及超聲聯(lián)合造影劑微泡輻照的方法對(duì)40只新西蘭兔前列腺進(jìn)行治療，切片HE染色光學(xué)顯微鏡下檢測(cè)治療后兔前列腺腺體組織及細(xì)胞的病理改變；使用透射式電子顯微鏡觀察各組前列腺細(xì)胞及細(xì)胞間連接結(jié)構(gòu)的超微變化。 2、以伊文思藍(lán)為示蹤劑，通過(guò)熒光顯微鏡觀察治療后各組伊文思藍(lán)溶液漏出在前列腺組織分布的差異；制作伊文思藍(lán)定量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及回歸方

4、程定量分析各組前列腺組織治療后的伊文思藍(lán)濃度以反映前列腺經(jīng)不同處理后通透性的差別。 3、TUNEL法觀察各實(shí)驗(yàn)方法對(duì)于兔前列腺腺體上皮細(xì)胞凋亡表達(dá)水平的影響。 材料與方法：40只健康8月齡性成熟新西蘭大白兔，隨機(jī)分為2大組，每組各20只。 1.第1大組依方法一處理，分別分為單純超聲組（US）、單純微泡組（MB）、超聲聯(lián)合微泡輻照組（US+MB）及空白對(duì)照組（CO）。開(kāi)腹充分暴露前列腺前方的精囊，經(jīng)耳緣靜脈注射2％

5、伊文思藍(lán)（EB）后，注射微泡造影劑，同時(shí)經(jīng)精囊輻照其后方的兔前列腺10分鐘，US組僅作單純超聲輻照10分鐘，MB組只注射5mL“脂氟顯”微泡懸液，CO組僅注射生理鹽水5mL。術(shù)后經(jīng)腹主動(dòng)脈灌注，取前列腺并作冰凍切片，熒光顯微鏡觀察EB在前列腺組織中的滲漏；檢測(cè)EB甲酰胺溶液的最大吸收峰值并測(cè)量梯度濃度EB溶液的光密度值回歸出EB－光密度值曲線(xiàn)及回歸方程，以3mL甲酰胺溶液萃取出實(shí)驗(yàn)兔前列腺組織中的EB并測(cè)量其光密度值（OD），代入回歸方

6、程求得EB漏出總量及前列腺組織中EB濃度。 2.第2大組按方法二處理，分組、治療同上法，但不注射伊文思藍(lán)及肝素化生理鹽水灌注。術(shù)后取前列腺切片作HE染色、透射式電子顯微鏡觀察超聲及超聲聯(lián)合微泡及單純微泡對(duì)兔前列腺的超微結(jié)構(gòu)的影響；前列腺標(biāo)本作TUNEL染色并統(tǒng)計(jì)各組前列腺細(xì)胞凋亡指數(shù)（AI）以考察其對(duì)前列腺細(xì)胞凋亡表達(dá)水平的影響。 結(jié)果：US組、MB組、US+MB組及CO組前列腺冰凍切片內(nèi)均可發(fā)現(xiàn)紅色EB熒光分布；經(jīng)蘇木

7、素復(fù)染后可見(jiàn)US+MB組部分腺腔內(nèi)出現(xiàn)紅色EB熒光，而US、MB及CO組紅色熒光僅分布于前列腺周邊及間質(zhì)的纖維組織中，腺腔內(nèi)均紅色EB熒光。 全波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)EB甲酰胺溶液在625nm波長(zhǎng)處具有最大吸收峰，根據(jù)梯度濃度EB溶液在625nm測(cè)得的OD值得出回歸方程y=12.569X+0.120（y為EB濃度，X為OD值，F(xiàn)=3795.2，決定系數(shù)R2=0.998），各組測(cè)得OD值代入回歸方程求得US+MB組前列腺EB平均濃度10.

8、385±0.790μg/g、US組為6.706±0.312μg/g、MB組6.258±0.352μg/g，CO組6.099±0.508μg/g，US+MB組與其余各組兩兩比較均有顯著差異，說(shuō)明US+MB組前列腺EB濃度明顯高于其余各組，US組與船及CO組EB濃度均值皆有一定差異，但差異均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 US、MB、CO組兔前列腺組織在光鏡下均未見(jiàn)明顯異常，胞漿、細(xì)胞核染色均勻，腺體上皮組織排列整齊、完整，腺腔內(nèi)未見(jiàn)特殊，US

9、+MB組前列腺腺體細(xì)胞胞漿、細(xì)胞核等在光鏡下均未見(jiàn)明顯異常，但腺體上皮組織排列紊亂，細(xì)胞間結(jié)構(gòu)松散，腺腔內(nèi)可見(jiàn)大量嗜伊紅染的液體；MB組及CO組前列腺組織TUNEL染色光鏡下僅見(jiàn)稀少黃褐色陽(yáng)性細(xì)胞，US組對(duì)比MB組，TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目明顯增加，US+MB組TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞光鏡下呈分布密集；各組AI值統(tǒng)計(jì)，CO組為5.800±1.241％，MB組為6.420±2.454％、US組為30.780±4.634％、US+MB組為42.

10、636±2.430％，US+MB組與其余各組間AI值兩兩比較，P均<0.01，說(shuō)明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，即US+MB組AI明顯高于其余各組，而US組則明顯高于MB及CO組，MB組與CO組AI均值未見(jiàn)顯著差異。 CO、MB組前列腺組織在透射電鏡下可見(jiàn)腺體細(xì)胞分泌活躍，腺腔內(nèi)及細(xì)胞內(nèi)均可見(jiàn)大量分泌顆粒，線(xiàn)粒體腫脹，細(xì)胞間的緊密連接形態(tài)正常；US則腺體細(xì)胞活動(dòng)明顯降低，細(xì)胞器及分泌顆粒均明顯減少，細(xì)胞間緊密連接擴(kuò)張，部分呈囊狀擴(kuò)張；U

11、S+MB組可見(jiàn)大量細(xì)胞崩解、破壞，腺腔塌陷。 結(jié)論： 1.一定強(qiáng)度的脈沖式超聲輻照可通過(guò)空化作用提高前列腺組織、細(xì)胞的通透性，從而打開(kāi)前列腺屏障。 2.脈沖式超聲聯(lián)合一定濃度的造影劑微泡輻照可有效增強(qiáng)超聲開(kāi)放兔前列腺血管管壁上皮到前列腺腺管上皮組織間的屏障結(jié)構(gòu)，從而提高了兔前列腺的通透性從而提高了藥物、大分子物質(zhì)穿透前列腺的能力。 3.超聲聯(lián)合微泡開(kāi)放血－前列腺屏障的機(jī)制主要為：超聲波導(dǎo)致微泡在管腔中發(fā)生