尼辛和a-亞麻酸對延邊黃牛瘤胃發(fā)酵參數、甲烷生成及微生物多樣性的影響.pdf

1、本研究包括3個實驗，用于研究尼辛（Nisin）和a-亞麻酸（LNA）對延邊黃牛瘤胃發(fā)酵參數、甲烷生成及微生物多態(tài)性的影響。主要研究工作如下：
　　實驗一：Nisin對延邊黃牛瘤胃微生物體外發(fā)酵參數與甲烷生成的影響
　　本實驗旨在研究Nisin對延邊黃牛瘤胃微生物體外發(fā)酵參數影響。日糧精粗比為7:3，利用體外發(fā)酵法研究，設計4個水平3個重復，通過分別添加0mg/L、1.25mg/L、2.50mg/L和5mg/L的Nisin研究

2、其對反芻動物瘤胃發(fā)酵參數的影響。經過恒溫培養(yǎng)箱39℃培養(yǎng)12h，在設定的時間內測定pH值、氣體（氣體總量、H2、CH4、CO2）、氨氮濃度(NH3-N)及揮發(fā)性脂肪酸(VFA)濃度。結果表明，Nisin在設定濃度范圍內對產氣量和pH都沒有顯著影響。Nisin能夠降低瘤胃液中氨氮濃度，在6h時Nisin添加組與對照組相比差異極顯著（p<0.01）；Nisin降低了VFA中乙酸/丙酸的比值，在6h培養(yǎng)時間點后，各處理組和對照組差異極顯著（p

3、<0.01）；Nisin降低了甲烷的產量，在3h時間點以后，各處理組與對照組差異極顯著（p<0.01），同時提高了H2的產量，在6h以后，各處理組與對照組差異極顯著（p<0.01），但對CO2產量沒有影響。以上結果表明，Nisin在體外條件下，能夠改變瘤胃發(fā)酵類型。
　　實驗二：尼辛和α-亞麻酸對延邊黃牛瘤胃微生物體外發(fā)酵特性及甲烷生成的影響
　　本實驗旨在研究尼辛（nisin）和α-亞麻酸（α-Linolenic acid

4、,LNA）對延邊黃牛瘤胃微生物體外發(fā)酵特性與甲烷生成的影響。試驗利用體外靜態(tài)模擬發(fā)酵法，設計4個處理，對照組，5mg/L的Nisin（N組），0.67mg/L的α-亞麻酸（LNA組），5mg/L的Nisin和0.67mg/L的α-亞麻酸（N-LNA組）研究其對反芻動物瘤胃發(fā)酵參數及CO2，CH4，H2生成的影響。經過恒溫培養(yǎng)箱39℃培養(yǎng)12h，在設定的時間內測定pH、氨態(tài)氮(NH3-N)濃度、揮發(fā)性脂肪酸(VFA)濃度以及產氣量（總產氣

5、量、CO2、CH4、H2）。結果表明，經過3h培養(yǎng)，LNA組和N-LNA組與對照組和N組相比，LNA組和N-LNA組提高了pH值，差異極顯著（p<0.01）。Nisin和LNA降低了瘤胃液中氨態(tài)氮濃度，在6、12h時，N組、LNA組和N-LNA組與對照組相比，N組、LNA組和N-LNA組顯著低于對照組（p<0.01）。Nisin和LNA增加了丙酸的濃度，降低了VFA中乙酸/丙酸的比例，在6h培養(yǎng)時間，N組、LNA組和N-LNA組與對照組

6、相比，顯著增加了丙酸濃度（p<0.05）；經過12h培養(yǎng)與對照組相比N組、LNA組和N-LNA組增加了丙酸濃度（p<0.01）。對總產氣量的影響，在3h、6h和12h，LNA組和N-LNA組與對照組和N組相比，LNA組和N-LNA組顯著降低了總產氣量，差異極顯著（p<0.01），而 N組和對照組之間無差異（p>0.05）。在3h、6h和12h，LNA組和N-LNA組與對照組和N組相比降低了CO2的產量（p<0.01），N組、LNA組和N

7、-LNA組與對照組相比顯著降低了CH4的產量（p<0.01）。在各培養(yǎng)時間點，N組與對照組相比增加了H2產量（p<0.01），LNA組與對照組相比降低了H2產量，在6h差異極顯著（p<0.01），N-LNA與 N組相比差異極顯著（p<0.01），在12hN-LNA與對照組相比無顯著差異，在6h，12hN-LNA組 H2的產量顯著高于LNA組。結果表明，在體外培養(yǎng)條件下，Nisin和LNA及其復合作用提高了丙酸濃度，降低了甲烷生成，Nis

8、in和LNA的混合作用能夠更大程度降低甲烷產量，同時添加LNA能夠轉移單獨添加Nisin時產生的H2，進一步改變了瘤胃微生物的發(fā)酵類型。
　　實驗三:運用PCR-DGGE分析 Nisin和LNA對瘤胃微生物多樣性的影響
　　本實驗旨在對實驗二12h反應終止時的樣品，運用PCR-DGGE技術分析Nisin和LNA對瘤胃微生物多樣性的影響，為添加Nisin和LNA對瘤胃調控結果提供基礎參考。對實驗二12h反應終止時的樣品進行處理

9、，提取總DNA，采用凝膠變性電泳技術（Denaturing gradient gel electrophoresis DGGE）分析群落結構。不同處理組的DGGE圖譜條帶的數目和條帶顏色深淺有一定的差異，Nisin處理組與對照組間的相似性較高，LNA組和N-LNA組與對照組間相似性較低。N組與對照組相比,LNA組與N-LNA組相比，Shannon-Wiener多樣性指數和Simpson多樣性指數差異都不顯著（p>0.05），LNA組和N