α-亞麻酸對瘤胃微生物生物氫化中間產(chǎn)物的影響.pdf

1、本研究包括3個(gè)試驗(yàn)，用于研究α-亞麻酸在體外發(fā)酵中不同濃度及不同日糧比例下的氫化過程及對瘤胃發(fā)酵參數(shù)，甲烷生成的影響。主要研究工作如下：
　　試驗(yàn)一：不同比例α-亞麻酸對瘤胃體外發(fā)酵特性及生物氫化代謝產(chǎn)物的影響
　　本試驗(yàn)采用體外法添加不同濃度游離的α-亞麻酸，研究對瘤胃發(fā)酵模式及C18不飽和脂肪酸氫化過程的影響。設(shè)4個(gè)組，分別添加干物質(zhì)基礎(chǔ)（w/w）的0％（對照，CON）、1.5%（低添加量，LL）、3.0%（中添加量，M

2、L）、4.5%（高添加量，HL）的α-亞麻酸，3個(gè)重復(fù)。結(jié)果表明： ML組、HL組氨氮、總揮發(fā)性脂肪酸（TVFA）、乙酸、丁酸濃度均顯著低于CON組（P＜0.05），丙酸濃度極顯著高于CON組（P＜0.01）。在6h、9h和12h，培養(yǎng)過程中LL組與CON、MM和HL組相比氫氣產(chǎn)量皆為最高（P＜0.01）。在3h，與CON組相比，隨α-亞麻酸添加量升高，CO2和 CH4產(chǎn)量逐漸下降（P＜0.01）。CON組及 LL組亞油酸（c9,c12

3、-C18:2）濃度隨培養(yǎng)時(shí)間延長而下降，其余兩組隨時(shí)間升高，在12h ML組達(dá)到最大值，超過 CON組和 LL組（P＜0.01）。HL組 c9,t11,c15-CLnA，c9,t13,c15-CLnA含量在各時(shí)間點(diǎn)顯著高于其他組（P＜0.01）。ML組、HL組在12 h時(shí)共軛亞油酸（CLA）及共軛亞麻酸（CLnA）的含量顯著高于其他組（P＜0.01）。因此飼糧中添加α-亞麻酸可以改變瘤胃發(fā)酵模式，降低CO2和CH4的產(chǎn)量，且抑制作用隨添

4、加量增加而增強(qiáng)。產(chǎn)生多種 C18:1異構(gòu)體，促進(jìn)瘤胃液內(nèi)t11,c15-C18:2及共軛亞油酸（CLA）和共軛亞麻酸（CLnA）的累積，且總 CLnA與α-亞麻酸存在劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　試驗(yàn)二：不同粗精比條件下添加α-亞麻酸對瘤胃生物氫化代謝產(chǎn)物的影響
　　本試驗(yàn)采用體外法在不同日糧配比中添加α-亞麻酸，研究對瘤胃發(fā)酵模式及α-亞麻酸氫化過程的影響。設(shè)5個(gè)粗精水平，分別為粗精比8:2、6:4、5:5、4:6和2:8（w/w）

5、，在每組中都添加3.0%的α-亞麻酸（w/w）。每個(gè)水平設(shè)3個(gè)重復(fù)。結(jié)果表明：在各時(shí)間點(diǎn)，隨著精料比例的增加，pH呈上升趨勢，且2:8組與其余4組比較差異顯著（P＜0.05）。添加α-亞麻酸條件下，不同粗精比對TVFA影響不顯著。6h和12h，乙酸濃度一直與精料比例呈反比。各組丙酸濃度隨時(shí)間變化遲緩，4:6組丙酸濃度在各時(shí)間點(diǎn)均高于其他組，且差異極顯著（P＜0.01）。2:8組NH3-N濃度在各時(shí)間點(diǎn)均大于8:2、6:4組，且差異極顯著

6、（P＜0.01）。隨精料比例的增加，各時(shí)間點(diǎn) CH4，CO2和產(chǎn)氣量均呈增加趨勢。T11-C18:1整個(gè)培養(yǎng)時(shí)間內(nèi)隨粗料的比例升高而增加。8:2組t11-C18:1在3h與其他4組比較無顯著性差異（P＞0.05）；6h、12h，CLA濃度各組均無顯著差異。c9,c12-C18:2濃度與粗料比例呈正比關(guān)系，粗料增加總CLnA顯著增加，8:2組濃度在整個(gè)培養(yǎng)過程與其他組比差異顯著（P＜0.05）。因此在添加α-亞麻酸條件下，粗料比例增加可以

7、增加瘤胃液中乙酸和TVFA含量，降低丙酸和NH3-N含量。升高精料比例可以增加總產(chǎn)氣量和CO2的產(chǎn)生，同時(shí)減少CH4的生成。高精料通過降低TVFA增加瘤胃中pH。試驗(yàn)中添加α-亞麻酸時(shí)，促進(jìn)了氫化微生物對亞麻酸的氫化作用，同時(shí)抑制了對亞油酸的氫化過程。
　　試驗(yàn)三：運(yùn)用Real Time-PCR檢測α-亞麻酸及日糧配比對氫化微生物的影響
　　本試驗(yàn)旨在對試驗(yàn)一，二中6h，12 h樣品，運(yùn)用Real Time-PCR檢測α-亞

8、麻酸及日糧配比對氫化微生物的影響，為α-亞麻酸對瘤胃調(diào)控結(jié)果及其氫化過程提供基礎(chǔ)參考。對試驗(yàn)一，二兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)樣品進(jìn)行處理，提取DNA，純化，運(yùn)用運(yùn)用Real-time PCR技術(shù)，對B. fibrisolvens、B. proteoclasticus和B. flavefaciens的數(shù)量的變化進(jìn)行監(jiān)測。結(jié)果表明：6h B. fibrisolvens，B. proteoclasticus和 B. flavefaciens的DNA量與α-亞

9、麻酸添加量呈反比，且各組差異極顯著（P＜0.01）。6h-12h，三種菌DNA量均升高。12h，B. fibrisolvens，B. proteoclasticus的DNA量隨亞麻酸添加極顯著降低（P＜0.01），而B. flavefaciens的DNA量在ML組達(dá)到最高。隨粗精比升高，6h和12h的B. fibrisolvens，B. flavefaciens逐漸升高，且8:2，6:4，2:8組間差異極顯著（P＜0.01），5:5與4

10、:6組比較差異不顯著（P＞0.05）。6h，B. proteoclasticus在5:5組達(dá)到最大值，與其他組比較差異極顯著（P＜0.01）；12h，B. proteoclasticus在4:6組達(dá)到最大值（P＜0.01）。因此認(rèn)為亞麻酸對B. flavefaciens的毒性小于B. fibrisolvens。在添加α-亞麻酸的條件下，日糧中粗飼料比例越高越有利于這三種氫化細(xì)菌的生長，且添加α-亞麻酸條件下pH變化與B. flavefa