真菌性角膜炎動物模型的建立及糖皮質(zhì)激素對其發(fā)病過程的影響.pdf

1、真菌性角膜炎是一種嚴重的致盲性眼病，于1879年首先由Leber報道，20世紀60年代以來，由于廣譜抗生素和糖皮質(zhì)激素的大量使用，角膜接觸鏡的佩戴增加和診斷技術(shù)的提高，真菌性角膜炎發(fā)病率逐年增加。我國為一農(nóng)業(yè)大國，從事農(nóng)業(yè)人口居多，農(nóng)業(yè)性外傷尤其是植物性外傷多見，為真菌的角膜種植性感染提供了機會，且多為鐮刀菌和曲霉菌。臨床缺乏低毒高效的抗真菌藥物，手術(shù)治療受到供體來源匱乏及術(shù)后復發(fā)等因素的限制，致使許多病人最終喪失視力，甚至摘除眼球。因

2、此真菌性角膜炎已經(jīng)引起國內(nèi)外學者的高度重視，成為感染性角膜病研究的焦點。目前由于缺乏可靠的真菌性角膜炎動物模型，使真菌性角膜炎發(fā)病機制的研究受到影響，也不清楚糖皮質(zhì)激素對真菌性角膜炎發(fā)病過程的影響。 目的 建立模擬人角膜真菌感染動物模型，觀察真菌性角膜炎模型眼自然發(fā)展過程及臨床特征變化，并在角膜炎發(fā)病的不同階段行組織病理學檢查和病原培養(yǎng)，觀察角膜炎發(fā)展過程中角膜組織內(nèi)真菌病原繁殖情況及組織破壞情況，進一步研究糖皮質(zhì)激素對

3、實驗性真菌性角膜炎臨床表現(xiàn)和組織病理學的影響及其對角膜中真菌的作用方式，以期對臨床研究提供實驗依據(jù)。 材料及方法 1．選用兩種常見致病真菌，茄病鐮孢菌及煙曲霉菌，劃痕接種法建立C57BL/6小鼠真菌性角膜炎動物模型各50只眼，每日行裂隙燈顯微鏡觀察，在病程第1、4、6、8、14天對病變角膜行角膜刮片染色及角膜組織培養(yǎng)鑒定感染菌種。角膜標本進行組織病理學檢查，觀察各種真菌在角膜組織內(nèi)的生長方式和角膜組織的病理學變化過程。

4、2.C57BL/6小鼠244只，隨機分為4個實驗組及1個對照組，實驗組各56例，對照組20例。應用角膜劃痕法，組1組2接種茄病鐮孢菌，組3組4接種煙曲霉菌，均為右眼接種。接種后連續(xù)3天，組2組4給予0.5﹪地塞米松磷酸鈉滴眼液點眼，觀察不同時期地塞米松磷酸鈉組眼部表現(xiàn)及病理檢查與未用組及對照組的差別。 3.所有統(tǒng)計學數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學處理，采用非參數(shù)兩個獨立樣本檢驗分析各組臨床評分，采用t檢驗分析病理切片

5、結(jié)果。P<0.05為差異有顯著意義。(以α=0.05為檢驗水準)。 結(jié)果 1.茄病鐮孢菌動物90﹪接種成功，術(shù)后第2天可觀察到典型的真菌性角膜炎表現(xiàn)，第4天組織病理學檢查可見真菌生長于角膜基質(zhì)淺層，部分模型眼角膜上皮修復。第9天后可見有新生血管從周圍侵入，第4、8、14天真菌培養(yǎng)陽性率分別為90﹪、70﹪、50﹪。煙曲霉菌動物100﹪接種成功，術(shù)后角膜炎癥反應重，病情進展快，角膜組織壞死嚴重，第9天后開始有新生血管從周圍

6、長入，第4、8、14天真菌培養(yǎng)陽性率分別為100﹪、70﹪、50﹪。第14天角膜組織病理學切片中仍可見真菌病原體。 2.地塞米松磷酸鈉組小鼠病程延長，接種后2周內(nèi)角膜炎表現(xiàn)比未用組嚴重，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，病理檢查顯示角膜中病原菌負荷量及其侵襲力增加(P<0.05)。糖皮質(zhì)激素影響下，真菌菌絲粗大，茄病鐮孢菌在角膜內(nèi)呈水平生長模式，平行于角膜板層向深層浸潤，逐漸靠近并穿透角膜內(nèi)皮；煙曲霉菌的菌絲在角膜內(nèi)生長方向雜亂