載脂蛋白A-I模擬肽D——4F通過(guò)eNOS-NO途徑促進(jìn)人外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞增殖、遷移、黏附功能的體外研究.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)病，歐美國(guó)家疾病致死原因的50％以上與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)，我國(guó)近年來(lái)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病率也呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。因此，通過(guò)新作用機(jī)制的研究，尋找有效又安全的抗動(dòng)脈粥樣硬化藥物，具有重要意義。內(nèi)皮細(xì)胞功能紊亂貫穿于動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的全過(guò)程，因此靶向內(nèi)皮細(xì)胞，糾正其功能紊亂，可有效對(duì)抗動(dòng)脈粥樣硬化的形成。由于成熟內(nèi)皮細(xì)胞是終末分化細(xì)胞，其增殖潛能很低，導(dǎo)致其修復(fù)受損內(nèi)皮的能力有限，因而需要由血管內(nèi)皮細(xì)

2、胞外的干細(xì)胞來(lái)修復(fù)大面積創(chuàng)傷。最近諸多研究均支持內(nèi)皮祖細(xì)胞學(xué)說(shuō)。即骨髓來(lái)源的內(nèi)皮祖細(xì)胞，平時(shí)僅少量釋放到循環(huán)的血液里，而當(dāng)心肌梗死時(shí)，機(jī)體則動(dòng)員更多的內(nèi)皮祖細(xì)胞進(jìn)入循環(huán)中，流動(dòng)在循環(huán)血中的內(nèi)皮祖細(xì)胞即到達(dá)損傷部位，黏附于受損血管表面，進(jìn)行損傷修復(fù)。運(yùn)動(dòng)、他汀類(lèi)藥物、雌激素等對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量和功能有正向作用，而內(nèi)皮祖細(xì)胞維護(hù)血管內(nèi)皮功能和結(jié)構(gòu)完整的機(jī)制一是修復(fù)內(nèi)皮細(xì)胞，二是促進(jìn)新血管形成。
　　 近年來(lái)，通過(guò)對(duì)高密度脂蛋白的主要

3、蛋白成分載脂蛋白A-I的抗動(dòng)脈粥樣硬化結(jié)構(gòu)特征和生物學(xué)特性研究發(fā)現(xiàn)，載脂蛋白A-I的A型兩親性螺旋結(jié)構(gòu)具有較強(qiáng)的脂質(zhì)結(jié)合能力。其模擬肽是人工合成的具有載脂蛋白A-I類(lèi)似功能的兩親性螺旋肽類(lèi)。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)模擬肽的研究，多集中于動(dòng)脈壁和血液中的成熟細(xì)胞，而未有對(duì)血管壁祖細(xì)胞的研究報(bào)道。根據(jù)動(dòng)脈粥樣硬化的炎癥免疫損傷假說(shuō)，內(nèi)皮結(jié)構(gòu)與功能完整性的破壞是病灶發(fā)生的關(guān)鍵起始點(diǎn)，而內(nèi)皮祖細(xì)胞對(duì)內(nèi)皮系統(tǒng)的損傷修復(fù)則是維持內(nèi)皮完整性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。因此假設(shè)載

4、脂蛋白A-I模擬肽的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用可能通過(guò)增強(qiáng)內(nèi)皮祖細(xì)胞對(duì)動(dòng)脈血管壁受損傷內(nèi)皮的修復(fù)，從而保護(hù)內(nèi)皮系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與功能的完整性，最終減少動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。
　　 載脂蛋白A-I模擬肽D-4F已被證實(shí)通過(guò)隔離氧化磷脂、誘導(dǎo)高密度脂蛋白重構(gòu)及促膽固醇自巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞流出而具有抗動(dòng)脈粥樣硬化特性。然而，D-4F對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)功能影響尚不明確。
　　 內(nèi)皮祖細(xì)胞分離自成年男性志愿者，以攝取Dil-acLDL、結(jié)合UEA

5、及流式細(xì)胞術(shù)鑒定。以辛伐他汀為陽(yáng)性對(duì)照，在加或不加D-4F的情況下，分析內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖、遷移、粘附、NO產(chǎn)物及eNOS表達(dá)。
　　 與對(duì)照組相比，D-4F劑量依賴(lài)性的增強(qiáng)內(nèi)皮祖細(xì)胞的增殖、遷移、粘附功能。然而，這些效應(yīng)在與一氧化氮合酶阻滯劑L-NAME共孵育后減弱。而且D-4F能增加培養(yǎng)液上清一氧化氮產(chǎn)生和eNOS蛋白表達(dá)。10μg/ml濃度D-4F對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞的促進(jìn)作用與0.5μM辛伐他汀相當(dāng)。
　　 我們的結(jié)果提示