雌激素反應性指蛋白Efp對Polo樣激酶3作用的研究.pdf

1、目的:
　　對于雌激素受體(estrogen receptor, ER)陽性的乳腺癌患者，內分泌治療是其最有效的綜合治療方案之一。然而，目前臨床上大約40％的ER陽性乳腺癌患者對內分泌治療產(chǎn)生原發(fā)或繼發(fā)性耐藥，這為乳腺癌治療構成嚴重阻礙。雌激素反應性指蛋白（Estrogen-responsive finger protein，Efp）是ER信號通路的重要下游靶蛋白之一。作為一種E3泛素連接酶，其結構域中的B-box與卷曲螺旋可特異

2、性地干擾細胞周期負調控因子14-3-3σ，通過泛素蛋白酶體途徑介導14-3-3σ降解，這一途徑是導致ER陽性乳腺癌患者內分泌治療耐藥的原因之一。最近研究顯示，在乳腺癌組織中，Polo樣激酶3(Plk3)的表達與ER表達呈負相關，并且Plk3可抑制ER+乳腺癌細胞的增殖，而前者可被DNA損傷檢測點激活，通過介導細胞周期停滯為受損DNA提供修復時間來抑制原癌基因發(fā)生轉變，降低缺陷基因的積累，是一種潛在的抑癌基因。另外，Plk3在細胞內很容易

3、被降解且可以被蛋白酶抑制劑MG132穩(wěn)定，據(jù)此推測，Plk3在乳腺癌細胞中的低表達有可能也是由Efp通過泛素途徑降解引起。為了驗證這一假設，我們設計了本課題，旨在研究ER陽性乳腺癌細胞與乳腺癌組織中Efp與Plk3的表達情況及其之間的相互關系，以期為Efp在雌激素依賴型乳腺癌內分泌治療耐藥機制中的作用提供新的實驗數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。
　　方法:
　　1應用實時定量PCR檢測54例乳腺癌患者乳腺癌組織中Efp與Plk3mRNA的表

4、達狀況，以及其與相關臨床病理指標間的關系。
　　2應用基因轉染、RT-PCR方法研究Efp mRNA及Plk3 mRNA在ER陽性乳腺癌細胞中的表達狀況。
　　3利用基因轉染、原位移植方法構建裸乳腺癌鼠荷瘤模型，測量生長中的瘤體變化，繪制腫瘤生長曲線，實驗結束處死小鼠后稱量瘤體重量，并分析轉染Efp與Plk3基因處理對腫瘤發(fā)展的影響。
　　4通過免疫組織化學方法檢測小鼠移植瘤組織中Efp與Plk3蛋白的表達狀況，并分析

5、兩者表達之間的關系。
　　結果:
　　154例乳腺癌患者乳腺癌組織中Efp與Plk3 mRNA表達的相對定量分析結果顯示，Efp與Plk3基因表達呈正相關（r=0.554，P＜0.01）。Efp、Plk3mRNA表達水平與患者年齡、腫瘤大小、絕經(jīng)狀況、淋巴結轉移情況、病理分期和病理類型無明顯關系。Efp與K-i67蛋白表達狀態(tài)有關(P=0.043); Plk3與ER蛋白表達有關(P=0.012)，且具有正相關性(r=0.30

6、7，p=0.025)。
　　2 RT-PCR分析結果顯示，于MCF-7細胞系單獨轉染Efp質粒后，Plk3mRNA表達水平明顯低于Efp未轉染組(P＜0.01);與單獨轉染Plk3組相比，共轉Efp和Plk3質粒組細胞Plk3mRNA表達水平明顯降低(P＜0.01)。
　　3成功建立ER陽性乳腺癌細胞MCF-7移植瘤裸鼠荷瘤模型。腫瘤瘤體積測量方差分析結果顯示，轉染空載體質粒瘤細胞對照處理組、單獨轉染Efp基因處理組、共同轉

7、染Efp和Plk3基因處理組和單獨轉染Plk3基因處理組小鼠的瘤體生長趨勢無明顯差異（F=0.009，P＞0.05）。實驗結束時稱量該四組荷瘤小鼠瘤體重量分別為:轉染空載體質粒瘤細胞對照處理組小鼠為1.88±0.15g，單獨轉染Efp基因處理組小鼠為2.13±0.19g，共同轉染Efp和Plk3基因處理組小鼠為1.96±0.23g，單獨轉染Plk3基因處理組小鼠為1.87±0.12g。單獨轉染Efp基因處理組小鼠瘤體重量與空載體質粒轉染

8、對照組相比明顯增加(P=0.049)，單獨轉染Efp基因處理組小鼠瘤體重量與單獨轉染Plk3基因處理組小鼠相比明顯增加(P=0.033)。
　　4免疫組織化檢測結果顯示，Plk3蛋白在空載體基因轉染對照處理組、單獨轉染Efp基因處理組、共同轉染Efp和Plk3基因處理組，單獨轉染Plk3基因處理組小鼠腫瘤組織中的表達積分光密度值(integrated opticaldensity, IOD)分別是:8.26±1.15、2.48±0