2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:觀察雌激素對(duì)載脂蛋白AⅠ(Apo AⅠ)基因轉(zhuǎn)錄的影響;探討Apo AⅠ基因啟動(dòng)子不同區(qū)域及ApoCⅢ/AⅣ基因調(diào)控元件在Apo AⅠ基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用,分析雌激素刺激對(duì)apoAⅠ基因表達(dá)的調(diào)節(jié)機(jī)制。 方法: 1.分別將0.01、0.1、1、10、20μmol/L雌激素與體外培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞共同孵育24h;選用10μmol/L的雌激素與HepG2細(xì)胞共同孵育0 h、1h、6h、24h、48h;分別提取總RNA

2、,采用半定量RT-PCR方法測(cè)定.Apo AⅠ mRNA表達(dá)水平,觀察不同劑量雌激素和不同刺激時(shí)間對(duì)Apo AⅠ mRNA表達(dá)的影響。 2.以攜帶螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因的質(zhì)粒pGL2為載體,構(gòu)建攜帶ApoAⅠ基因啟動(dòng)子不同長(zhǎng)度片段的重組質(zhì)粒pGL2/-41AⅠ、pGL2/-256AⅠ和pGL2/-2500AⅠ,以及同時(shí)攜帶ApoCⅢ/AⅣ基因的重組質(zhì)粒:pGL2/-41 AⅠ CⅢAⅣ、pGL2/-256AⅠ CⅢAⅣ、pGL2

3、/-2500AⅠ CⅢAⅣ;采用陽離子脂質(zhì)體法分別將重組質(zhì)粒與攜帶海腎熒光素酶報(bào)告基因的pRL-null質(zhì)粒內(nèi)參進(jìn)行雙質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染,并在HepG2細(xì)胞中表達(dá);轉(zhuǎn)染24小時(shí)后給予10μmol/L雌激素刺激,48小時(shí)后收集、裂解細(xì)胞,應(yīng)用雙熒光素酶檢測(cè)試劑盒檢測(cè)熒光素酶報(bào)告基因的熒光強(qiáng)度。 結(jié)果: 1.在體外培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞中,隨雌激素濃度的增加,Apo AⅠ mRNA表達(dá)呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì),以非生理劑量10μmol/

4、L時(shí)Apo AⅠ mRNA表達(dá)最高,與空白對(duì)照組及生理劑量濃度組(0.01、0.1、1μmol/L)相比有明顯差異(P<0.05),20μmol/L時(shí)Apo AⅠ mRNA表達(dá)降低,低于10μmol/L時(shí),但仍高于空白對(duì)照及生理劑量組。 2.隨加入雌激素刺激時(shí)間的延長(zhǎng),HepG2細(xì)胞中.Apo AⅠ mRNA表達(dá)呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì),雌激素刺激6h后 ApoAⅠ mRNA表達(dá)水平增加,與0 h、1h表達(dá)水平相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

5、(P<0.05);刺激24h后Apo AⅠ mRNA表達(dá)水平最高(P<0.05),48h后Apo AⅠ mRNA表達(dá)水平下降,與24h相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.包含ApoAⅠ基因啟動(dòng)子-256bp~+397bp和-2500bp~+397bp片段的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后表達(dá)的熒光素酶的相對(duì)活性明顯高于只含有-41bp~+397bp片斷的重組質(zhì)粒;同時(shí)攜帶ApoCⅢ/AⅣ基因片段的重組質(zhì)粒亦顯示相似的結(jié)果。 4.同時(shí)

6、攜帶ApoCⅢ/AⅣ基因和ApoAⅠ基因啟動(dòng)子不同長(zhǎng)度片段的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后表達(dá)的熒光素酶的相對(duì)活性明顯高于只連接Apo AⅠ不同啟動(dòng)子區(qū)域的重組質(zhì)粒pGL2/AⅠ,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 5.重組質(zhì)粒pGL2/-256AⅠ及pGL2/-2500AⅠ及pGL2/-256AⅠ CⅢAⅣ及pGL2/-2500AⅠ CⅢAⅣ轉(zhuǎn)染的HepG2細(xì)胞其表達(dá)的熒光素酶的相對(duì)活性雌激素組明顯高于對(duì)照組(P<0.05),而

7、pGL2/-41AⅠ及pGL2/-41AⅠ CⅢAⅣ質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后表達(dá)的熒光素酶相對(duì)活性在雌激素刺激前后差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論: 1.隨雌激素濃度的增加,體外培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞中Apo AⅠ mRNA表達(dá)呈現(xiàn)升高趨勢(shì),以濃度為10μmol/L時(shí)表達(dá)水平最高;以該濃度刺激6h后表達(dá)水平開始增加,24h達(dá)高峰,本研究顯示雌激素可在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)Apo AⅠ基因表達(dá),并呈現(xiàn)部分的劑量和時(shí)間依賴性。 2.A

8、po AⅠ基因轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)上游-256bp區(qū)域至上游-41bp區(qū)域,具有較強(qiáng)啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性,可能與該區(qū)域內(nèi)含有肝特異性增強(qiáng)子有關(guān)。含有-2500bp~+397bp片段與-256bp~+397bp片段相比,熒光強(qiáng)度雖有增強(qiáng),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,顯示Apo AⅠ基因啟動(dòng)子-256bp上游區(qū)域可能缺乏調(diào)控的順式作用元件。同時(shí)攜帶ApoCⅢ/AⅣ基因的重組質(zhì)粒的熒光強(qiáng)度明顯高于只含有Apo AⅠ基因片段的重組質(zhì)粒,表明Apo CⅢ/AⅣ基因調(diào)控區(qū)內(nèi)存

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