奧美拉唑膠囊人體藥代動力學研究及其代謝酶CYP2C19基因型的檢測.pdf

1、第一部分奧美拉唑膠囊人體生物等效性及藥代動力學研究 第一節(jié)血漿奧美拉唑濃度測定方法的建立 本實驗旨在建立測定人血漿奧美拉唑濃度的反相高效液相色譜法。采用二氯甲烷萃取血漿樣品：樣本血漿加入磷酸緩沖液(pH10.0)及二氯甲烷，混勻，萃取后取下層有機相，濃縮復溶后進樣分析。色譜柱為SymmetryShieldC18柱(150mm×4.6mm，5μm)，流動相為0.02mol/L磷酸二氫鉀(pH7.2)-乙腈(73∶27)，流

2、速1.00mL/min，檢測波長302nm。內(nèi)標法峰面積比定量。在此條件下，奧美拉唑血漿濃度在6.65～1330μg·L-1呈良好的線性關(guān)系，低、中、高三種濃度的絕對回收率分別為73.33％、75.16％和70.77％，相對回收率分別為101.66％、106.89％、101.67％，日內(nèi)、日間相對標準差(RSD)均小于15％。最低檢測限為6.65μg·L-1。該法簡便、準確，適用于奧美拉唑人體內(nèi)的藥代動力學研究。 第二節(jié)奧美拉唑

3、膠囊的相對生物利用度及生物等效性研究 采用兩制劑雙周期交叉設計進行試驗。22名男性健康志愿者隨機分成兩組，分別單劑量口服奧美拉唑膠囊40mg，一組受試者先服用試驗藥品，后服用對照藥品；另一組受試者先服用對照藥品，后服用試驗藥品。試驗分成兩周期進行，兩周期間間隔1周。采用反相高效液相色譜法測定血藥濃度，用DAS2.0計算各受試者的有關(guān)藥代動力學參數(shù)及相對生物利用度F值，采用方差分析、雙單側(cè)t檢驗及(1-2α)可信區(qū)間分別對試驗藥品

4、和對照藥品的AUC和Cmax等參數(shù)進行統(tǒng)計分析，用非參數(shù)檢驗對Tmax進行統(tǒng)計分析，然后作出生物等效性評價。 第三節(jié)奧美拉唑膠囊的人體藥代動力學研究 從奧美拉唑膠囊人體生物等效性試驗中我們發(fā)現(xiàn)，有兩名健康志愿者的藥時曲線下面積比同組其他健康志愿者的藥時曲線下面積平均值高出2～5倍，導致AUC值個體差異大，AUC標準差達均值80％以上，方差分析表明個體間的差異顯著。我們在AUC的均值±SD的范圍內(nèi)用單純隨機抽樣法篩選出7名

5、健康志愿者，用DAS2.0藥代動力學批處理程序計算這7名男性健康志愿者口服奧美拉唑膠囊40mg的藥代動力學參數(shù)，與前2名健康志愿者比較。結(jié)果表明這7名受試者單次口服奧美拉唑膠囊40mg的主要藥代動力學參數(shù)為：AUC0→121530.2±1035.7μg·h·L-1，AUC0→∞1562.6±1048.9μg·h·L-1，T1/21.05±0.28h，CL/F0.64±0.41L·h-1·kg-1；而這2名受試者單次口服奧美拉唑膠囊40m

6、g的主要藥代動力學參數(shù)分別為：AUC0→128897.8±4485.2μg·h·L-1，AUC0→∞9850.6±4938.5μg·h·L-1，T1/22.03±0.01h，CL/F0.23±0.11L·h-1·kg-1。兩名受試者的AUC0→12、AUC0→∞，均顯著高于另7名受試者的均值約2～5倍，T1/2延長，清除率CL/F降低。奧美拉唑在這兩名受試者的體內(nèi)過程與其他受試者存在顯著差異。 第二部分奧美拉唑的主要代謝酶CYP

7、2C19基因型的檢測 采用PCR結(jié)合限制性內(nèi)切酶技術(shù)進行CYP2C19基因型檢測。抽取外周靜脈血2ml,采用全血DNA提取試劑盒提取基因組DNA。鑒定ml型突變基因時，根據(jù)CYP2C19等位基因的第4個內(nèi)含子和第5個外顯子連接處兩側(cè)的堿基序列合成其特異性PCR引物，用限制性內(nèi)切酶SmaI消化其PCR產(chǎn)物，然后進行凝膠電泳分析。檢測m2型突變基因則根據(jù)CYP2C19等位基因的第4個外顯子兩端的內(nèi)含子堿基序列合成其特異性的PCR引物