慢性低氧與阿爾茨海默病相關的基礎研究.pdf

1、目的：
　　 本研究采用慢性低氧動物模型,利用Morris水迷宮實驗和8-臂迷宮實驗來檢測小鼠空間學習記憶和認知功能,并測定小鼠皮質、海馬、紋狀體內(nèi)β-淀粉樣蛋白(Aβ40)的表達,結合整體行為學和分子生物學指標來探討慢性低氧與阿爾茨海默病的相關性。
　　 方法：
　　 (1)實驗分組:①選用3月齡清潔級C57BL/6J雄性小鼠42只,隨機分成3組:第1組常氧對照組(n=14)；第2組為4周低氧組(n=14)；第

2、3組為8周低氧組(n=14)；②選用12月齡清潔級C57BL/6J雄性小鼠42只,隨機分成3組:第1組常氧對照組(n=14)；第2組為4周低氧組(n=14)；第3組為8周低氧組(n=14)。
　　 (2)慢性低氧模型的制作:動物在低氧艙中覓食和飲水不受限制,按氣體流動方向設置低氧艙進出氣孔,由進氣孔向密閉低氧艙內(nèi)充人氮氣和氧氣,采用數(shù)字測氧儀檢測低氧艙中氧濃度,調(diào)節(jié)氣體流量和流速。慢性低氧組小鼠置于低氧箱中,O2濃度為8％-12

3、％,CO2濃度低于1％,每天持續(xù)8 h(9:00～17:00),分別連續(xù)低氧4周和8周；常氧對照組置于相同氧艙中,氧艙中為氧濃度21％的空氣,每天持續(xù)8 h(9:00～17:00),共4周。
　　 (3)觀察指標:①行為學檢測方法:采用Morris水迷宮實驗方法和8-臂迷宮實驗方法分別檢測小鼠空間參考記憶和空間工作記憶能力。②分子生物學指標:采用ELISA實驗方法測定小鼠皮質、海馬、紋狀體內(nèi)Aβ42的表達,用免疫組化方法測定小鼠

4、腦組織BrdU標記的神經(jīng)干細胞的表達。
　　 結果：
　　 (1)行為學檢測結果:①3月齡8周低氧組與3月齡4周低氧組及對照組相比Morris水迷宮的定位航行實驗的逃避潛伏期顯著延長,3月齡4周低氧組與對照組相比無統(tǒng)計學差異；3月齡各組在空間搜索實驗穿越原平臺位置的次數(shù)無統(tǒng)計學差異；3月齡8周低氧組Morris水迷宮重復獲取實驗中工作記憶成績顯著差于對照組,而與3月齡4周低氧組相比無統(tǒng)計學差異,3月齡4周低氧組與對照組相

5、比也無統(tǒng)計學差異。②12月齡8周低氧組與12月齡4周低氧組及對照組相比Morris水迷宮的定位航行實驗的逃避潛伏期顯著延長,12月齡4周低氧組與對照組相比逃避潛伏期也顯著延長；12月齡8周低氧組在空間搜索實驗穿越原平臺位置的次數(shù)顯著少于對照組,12月齡4周低氧組與對照組相比無統(tǒng)計學差異；12月齡各組在Morris水迷宮重復獲取實驗中工作記憶成績無統(tǒng)計學差異。③在8-臂迷宮訓練中,3月齡8周低氧組工作記憶及參考記憶錯誤次數(shù)顯著多于對照組及

6、3月齡4周低氧組,而3月齡4周低氧組與對照組相比無統(tǒng)計學差異；12月齡8周低氧組參考記憶錯誤次數(shù)明顯多于對照組,而12月齡4周低氧組與對照組相比無統(tǒng)計學差異,12月齡各組工作記憶錯誤次數(shù)無統(tǒng)計學差異。
　　 (2)分子生物學指標結果:①ELISA:12月齡8周低氧組海馬內(nèi)Aβ42表達顯著高于12月齡4周低氧組和對照組,而12月齡4周低氧組和對照組相比無統(tǒng)計學差異,三組之間的皮質、紋狀體內(nèi)Aβ42表達無統(tǒng)計學差異。②免疫組化實驗結

7、果:3月齡8周低氧組腦組織內(nèi)BrdU標記的陽性細胞數(shù)顯著低于3月齡4周低氧組和對照組,3月齡4周低氧組和對照組相比無統(tǒng)計學差異。
　　 結論：
　　 (1)慢性低氧能夠損害小鼠的空間學習記憶能力,低氧時間越久,這種損害程度越強；慢性低氧對成年小鼠長時記憶和短時記憶均有損害,但對老年小鼠以長時記憶損害為主。
　　 (2)慢性低氧8周能使12月齡小鼠海馬內(nèi)Aβ42表達增加,提示慢性低氧能夠促進小鼠腦組織老年斑的形成,