慢性低氧與阿爾茨海默病相關(guān)的基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的：
　　 本研究采用慢性低氧動物模型,利用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)和8-臂迷宮實(shí)驗(yàn)來檢測小鼠空間學(xué)習(xí)記憶和認(rèn)知功能,并測定小鼠皮質(zhì)、海馬、紋狀體內(nèi)β-淀粉樣蛋白(Aβ40)的表達(dá),結(jié)合整體行為學(xué)和分子生物學(xué)指標(biāo)來探討慢性低氧與阿爾茨海默病的相關(guān)性。
　　 方法：
　　 (1)實(shí)驗(yàn)分組:①選用3月齡清潔級C57BL/6J雄性小鼠42只,隨機(jī)分成3組:第1組常氧對照組(n=14)；第2組為4周低氧組(n=14)；第

2、3組為8周低氧組(n=14)；②選用12月齡清潔級C57BL/6J雄性小鼠42只,隨機(jī)分成3組:第1組常氧對照組(n=14)；第2組為4周低氧組(n=14)；第3組為8周低氧組(n=14)。
　　 (2)慢性低氧模型的制作:動物在低氧艙中覓食和飲水不受限制,按氣體流動方向設(shè)置低氧艙進(jìn)出氣孔,由進(jìn)氣孔向密閉低氧艙內(nèi)充人氮?dú)夂脱鯕?采用數(shù)字測氧儀檢測低氧艙中氧濃度,調(diào)節(jié)氣體流量和流速。慢性低氧組小鼠置于低氧箱中,O2濃度為8％-12

3、％,CO2濃度低于1％,每天持續(xù)8 h(9:00～17:00),分別連續(xù)低氧4周和8周；常氧對照組置于相同氧艙中,氧艙中為氧濃度21％的空氣,每天持續(xù)8 h(9:00～17:00),共4周。
　　 (3)觀察指標(biāo):①行為學(xué)檢測方法:采用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)方法和8-臂迷宮實(shí)驗(yàn)方法分別檢測小鼠空間參考記憶和空間工作記憶能力。②分子生物學(xué)指標(biāo):采用ELISA實(shí)驗(yàn)方法測定小鼠皮質(zhì)、海馬、紋狀體內(nèi)Aβ42的表達(dá),用免疫組化方法測定小鼠

4、腦組織BrdU標(biāo)記的神經(jīng)干細(xì)胞的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 (1)行為學(xué)檢測結(jié)果:①3月齡8周低氧組與3月齡4周低氧組及對照組相比Morris水迷宮的定位航行實(shí)驗(yàn)的逃避潛伏期顯著延長,3月齡4周低氧組與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；3月齡各組在空間搜索實(shí)驗(yàn)穿越原平臺位置的次數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；3月齡8周低氧組Morris水迷宮重復(fù)獲取實(shí)驗(yàn)中工作記憶成績顯著差于對照組,而與3月齡4周低氧組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,3月齡4周低氧組與對照組相

5、比也無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。②12月齡8周低氧組與12月齡4周低氧組及對照組相比Morris水迷宮的定位航行實(shí)驗(yàn)的逃避潛伏期顯著延長,12月齡4周低氧組與對照組相比逃避潛伏期也顯著延長；12月齡8周低氧組在空間搜索實(shí)驗(yàn)穿越原平臺位置的次數(shù)顯著少于對照組,12月齡4周低氧組與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；12月齡各組在Morris水迷宮重復(fù)獲取實(shí)驗(yàn)中工作記憶成績無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。③在8-臂迷宮訓(xùn)練中,3月齡8周低氧組工作記憶及參考記憶錯誤次數(shù)顯著多于對照組及

6、3月齡4周低氧組,而3月齡4周低氧組與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；12月齡8周低氧組參考記憶錯誤次數(shù)明顯多于對照組,而12月齡4周低氧組與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,12月齡各組工作記憶錯誤次數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 (2)分子生物學(xué)指標(biāo)結(jié)果:①ELISA:12月齡8周低氧組海馬內(nèi)Aβ42表達(dá)顯著高于12月齡4周低氧組和對照組,而12月齡4周低氧組和對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,三組之間的皮質(zhì)、紋狀體內(nèi)Aβ42表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。②免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)

7、果:3月齡8周低氧組腦組織內(nèi)BrdU標(biāo)記的陽性細(xì)胞數(shù)顯著低于3月齡4周低氧組和對照組,3月齡4周低氧組和對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：
　　 (1)慢性低氧能夠損害小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力,低氧時間越久,這種損害程度越強(qiáng)；慢性低氧對成年小鼠長時記憶和短時記憶均有損害,但對老年小鼠以長時記憶損害為主。
　　 (2)慢性低氧8周能使12月齡小鼠海馬內(nèi)Aβ42表達(dá)增加,提示慢性低氧能夠促進(jìn)小鼠腦組織老年斑的形成,