具核梭桿菌黏附和侵入上皮細(xì)胞的初步研究.pdf

1、菌斑是牙周病的始動因子。在牙周感染中，口腔細(xì)菌和牙齦上皮之間的相互作用占據(jù)著十分重要的位置。牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis,P.gingivalis)、伴放線放線桿菌(Actinobacillusactinomycetemcomitans,A.actinomycetemcomitans)，具核梭桿菌(Fusobacteriumnucleatum,F.nucleatum)均為重要的牙周可疑致病菌，黏附和侵入

2、是決定其毒力的重要因素之一。本研究擬以P.gingivalisATCC33277為陽性對照，用KB細(xì)胞體外模擬牙齦上皮細(xì)胞，初步研究F.nuleatum對上皮細(xì)胞的黏附和侵入能力；同時觀察在黏附和侵入的早期階段，在不同時間黏附和侵入量的變化以及F.nucleatum不同菌株之間黏附和侵入能力的差別。 將實驗菌P.gingivalisATCC33277、F.nuleatumATCCl0953以及F.nuleatumWCD05-1分

3、別配制成2×107CFU/ml的菌懸液，加入培養(yǎng)有KB細(xì)胞的24孔細(xì)胞培養(yǎng)板。在37。C，5％CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育2小時，進(jìn)行黏附和侵入測定。以P.gingivalis為陽性對照，觀察F.nuleatum對KB細(xì)胞的的黏附和侵入。 將實驗菌P.gingivalisATCC33277、F.nuleatumATCC10953以及F.nuleatumWCD05-1分別配制成2×107CFU/ml的菌懸液，加入培養(yǎng)有KB細(xì)胞的24孔

4、細(xì)胞培養(yǎng)板。在37。C，5％CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育。分別在1/2、1、2、3、4小時進(jìn)行黏附和侵入測定。初步探索時間與細(xì)菌黏附和侵入KB細(xì)胞的數(shù)量之間是否存在相關(guān)關(guān)系。所有實驗采用復(fù)孔設(shè)計，每組實驗重復(fù)3次。 結(jié)果采用單因素方差分析發(fā)現(xiàn)：(1)兩種F.nuleatum均能黏附和侵入KB細(xì)胞。與P.gingivalisATCC33277相比較，F(xiàn).nuleatumATCC10953的黏附和侵入能力稍弱，而F.nuleatumWC

5、D05-1比P.gingivalisATCC33277和F.nuleatumATCC10953有更強(qiáng)的黏附和侵入KB細(xì)胞的能力。 (2)在黏附和侵入早期，隨相互作用時間增加，F(xiàn).nuleatum黏附和侵入KB細(xì)胞的數(shù)量增加，并且臨床株的黏附和侵入能力明顯優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)株。在達(dá)到最大黏附和侵入量以后，細(xì)菌量有一定下降，但是至少在短時間內(nèi)可以保持一定的黏附和侵入水平。 綜上所述，F(xiàn).nuleatum能黏附和侵入上皮細(xì)胞，至少在短時