早期上皮細胞分化相關蛋白在視網(wǎng)膜色素上皮細胞增殖中的功能研究.pdf

1、目的：成熟RPE細胞在體內處于靜止狀態(tài)且與神經視網(wǎng)膜的結構和功能密切相關。RPE的增殖穩(wěn)態(tài)受到破壞會引起一系列視網(wǎng)膜病變。本課題組前期工作發(fā)現(xiàn)了一種早期上皮細胞分化相關蛋白（EEDA)在體外對RPE細胞的增殖具有明顯的抑制作用，但其在體的表達與生理功能尚不清楚。因此，本論文研究旨在探究這種新的功能基因在體內是否具有抑制RPE細胞增殖的功能，并解析其作用機制。
　　方法：利用CRISPR/Cas9技術對C57BL/6J小鼠進行基因敲

2、除；通過視網(wǎng)膜下腔注射0.25％透明質酸鈉，制造視網(wǎng)膜脫離模型；利用H E染色在體式顯微鏡下觀察Eeda基因敲除小鼠生理狀態(tài)和視網(wǎng)膜脫離情況下RPE的形態(tài)改變；利用RT-PCRd Western blot和免疫熒光染色等技術檢測基因敲除小鼠和R P E細胞增殖相關基因表達水平的變化。
　　結果：Eeda基因敲除小鼠在胚胎11.5天 RPE細胞Ki67陽性率較高。成年期Eeda基因敲除小鼠出現(xiàn)了多層排列的RPE結構。Eeda基因敲除

3、小鼠在視網(wǎng)膜脫離狀態(tài)下更容易被激活而進入增殖狀態(tài)。對于作用機制的研究，我們發(fā)現(xiàn)在過表達 EEDA的RPE細胞中，CDKN1A的表達上調，同時CDKN1A下游的細胞周期相關基因p107、E2F1和 p-RB表達下調。而在過表達EEDA的RPE細胞中干擾 CDKN1A可以部分挽救RPE細胞的增殖。
　　結論：EEDA作為一種新的細胞增殖抑制基因，可以在體內抑制RPE細胞的增殖。CDKN1A部分介導EEDA對 RPE的增殖調控。 EED