表達具核梭桿菌外膜fomA蛋白的嗜酸乳桿菌的構建及其生物效應研究.pdf

1、目的:構建能夠表達具核梭桿菌外膜fomA蛋白的嗜酸乳桿菌，通過體內(nèi)外實驗評估其在預防牙周感染等方面的生物學效應。
　　意義:以益生菌為載體、以阻斷菌斑生物膜的形成為目的、以口服為主要免疫途徑的牙周生態(tài)疫苗為牙周疾病的預防提供了新的思路。
　　方法:通過基因重組技術將具核梭桿菌的fomA基因重組至嗜酸乳桿菌的表達質(zhì)粒PMG36e中，通過電轉化將該重組質(zhì)粒轉化至嗜酸乳桿菌中，WesternBlot技術鑒定目的蛋白的表達。通過抑菌

2、及細菌粘附等實驗分析fomA蛋白對嗜酸乳桿菌基本特性的影響，藥敏實驗確保其生物安全性。將一定濃度重組菌經(jīng)口腔方式灌喂小鼠，ELISA檢測血清及小腸盥洗液中特異性抗體水平。具核梭桿菌經(jīng)fomA抗體處理后與牙齦卟啉單胞菌共培養(yǎng)，通過MTT、上皮細胞粘附實驗以及構建小鼠牙周膿腫模型等實驗，測試fomA抗體在干擾具核梭桿菌與牙齦卟啉單胞菌共聚中的作用。最后，用具核梭桿菌與牙齦卟啉單胞菌混合菌液在被免疫小鼠下頜唇側牙齦處制備牙齦膿腫模型，通過膿腫

3、大小及炎性因子水平來衡量口服重組菌對降低小鼠牙周感染風險的作用。
　　結果:
　　1.成功構建了能夠表達可溶性具核梭桿菌外膜蛋白的重組嗜酸乳桿菌。
　　2.除粘附性稍有增加外，該重組菌的菌落形態(tài)、生長狀態(tài)、抑菌性、藥物敏感性等生化特性沒有隨著外源fomA蛋白的分泌而發(fā)生改變，仍然具有可靠的生物安全性。
　　3.小鼠口服表達fomA抗原的重組菌后，可在小鼠血清及腸液中檢測到fomA特異性抗體。
　　4.fom

4、A特異性抗體可以在體外抑制具核梭桿菌與牙齦卟啉單胞菌的共聚，并可減輕混合菌液引起小鼠牙周組織炎癥反應的程度。
　　5.口服重組菌的小鼠，牙齦膿腫狀況較對照組輕微，血清中炎性因子IL-1β水平也較對照組低。
　　結論:嗜酸乳桿菌ATCC4356菌株可以穩(wěn)定的表達外源fomA可溶性蛋白，外源fomA蛋白的表達不會引起嗜酸乳桿菌的基本性質(zhì)的改變。FomA蛋白在具核梭桿菌與牙齦卟啉單胞菌的共聚中發(fā)揮重要作用。口服重組嗜酸乳桿菌可以誘