版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:1、通過檢測線粒體肌病/腦肌病的線粒體DNA(mtDNA)突變情況,探討線粒體肌病/腦肌病的基因型與臨床表型的關(guān)系。 2、建立和完善實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)合突變阻滯形成系統(tǒng)(RTARMS-qPCR)技術(shù),用于檢測線粒體DNA A3243G突變負(fù)荷,并探討線粒體肌病/腦肌病患者不同組織中突變負(fù)荷的分布情況。 方法: 1、采用聚合酶連反應(yīng)結(jié)合限制性酶切分析(PCR-RFLP)及測序等技術(shù)對45例臨床診斷或疑診線粒
2、體肌病/腦肌病的mtDNA A3302G、A3243G、T3271C、G3460A、A8344G、T8356C、T8993G、G11778A、T14484C、G15257A等突變熱點(diǎn)進(jìn)行篩查,分析突變陽性患者的臨床特點(diǎn)。 2、分別構(gòu)建含線粒體DNA3243位點(diǎn)的野生型(A)和突變型(G)序列的質(zhì)粒,將這兩種質(zhì)粒按一定比例混合構(gòu)建成13個(gè)含有不同A3243G突變負(fù)荷的標(biāo)準(zhǔn)對照,應(yīng)用PCR-限制性片斷多態(tài)性技術(shù)(RFLP)和RT A
3、RMS-qPCR技術(shù)檢測13個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對照及存在A3243G突變的患者及攜帶者的外周血、肌肉、毛發(fā)及尿沉渣等組織的A3243G突變負(fù)荷。 3、用PCR結(jié)合測序的方法對3例臨床確診而無熱點(diǎn)突變的線粒體肌病/腦肌病患者的骨骼肌全長mtDNA進(jìn)行序列分析。 結(jié)果: 1、45例臨床診斷或疑診線粒體肌病/腦肌病患者中8例A3243G異質(zhì)性突變陽性,占全部患者的17.78%,均表現(xiàn)為MELAS,且同一患者的肌肉組織、頭發(fā)、尿沉渣
4、等組織的A3243G突變型比例(突變負(fù)荷)較外周血高。 2、45例擬診線粒體肌病/腦肌病患者均無A3302G、T3271C、G3460A、A8344G、T8356C、T8993G、G11778A、T14484C、G15257A等熱點(diǎn)突變。 3、PCR-RFLP和RT ARMS-qPCR檢測含有不同A3243G突變負(fù)荷的標(biāo)準(zhǔn)對照經(jīng)的突變負(fù)荷均與預(yù)期值呈直線相關(guān),決定系數(shù)分別為R21=0.885、R22=0.991,RT A
5、RMS-qPCR檢測的結(jié)果更接近預(yù)期值:RT ARMS-qPCR檢測A3243G突變陽性患者及攜帶者的突變負(fù)荷比經(jīng)PCR-RFLP檢測的高,且RT ARMS-qPCR比PCR-RFLP更容易檢測出低負(fù)荷的A3243G突變,定量檢測的結(jié)果顯示MELAS患者的肌肉、尿沉渣、頭發(fā)的A3243G突變負(fù)荷均高于外周血。 4、3例臨床確診而無熱點(diǎn)突變的線粒體肌病/腦肌病患者經(jīng)mtDNA全長測序,共發(fā)現(xiàn)一個(gè)異質(zhì)性變異C5961T,5個(gè)同質(zhì)性變
6、異A14071G、C14632T、T1520C、G7600A、G7604A,120例對照均無上述變異。 結(jié)論: 1、mtDNA上的A3243G突變是我國線粒體肌病/腦肌病最常見的突變,基因檢測可以協(xié)助臨床診斷。 2、應(yīng)用RT ARMS-qPCR可以快速、靈敏、準(zhǔn)確地檢測不同組織的A3243G突變及其突變負(fù)荷。 3、異質(zhì)性突變的突變負(fù)荷在不同組織的分布不同,肌肉、尿液和毛發(fā)等組織較外周血高,尿液和毛發(fā)等經(jīng)無
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 線粒體腦肌病
- 線粒體腦肌病
- 線粒體腦肌病課件
- 線粒體(腦)肌病課件
- 線粒體腦肌病f
- 線粒體腦肌病ppt課件
- 線粒體腦肌病的診治進(jìn)展
- 線粒體腦肌病合并癲癇發(fā)作
- 線粒體腦肌病和肌病患者病理及基因突變研究.pdf
- 兒童線粒體腦肌病MELAS的臨床研究.pdf
- 線粒體腦肌病11例臨床分析.pdf
- 線粒體腦肌病臨床與全基因研究.pdf
- 線粒體(腦)肌病磁共振波譜的臨床價(jià)值研究.pdf
- 細(xì)胞生物學(xué)之線粒體腦肌病
- 伴發(fā)熱的線粒體腦肌病melas型一例
- 線粒體腦肌病97例臨床病例分析及文獻(xiàn)回顧.pdf
- 線粒體神經(jīng)胃腸腦肌病一家系臨床及TYMP基因突變分析.pdf
- 線粒體腦肌病一個(gè)家系的臨床、病理和分子病理研究.pdf
- 散發(fā)性帕金森病線粒體DNA部分點(diǎn)突變的研究.pdf
- 線粒體DNA A1555G突變分子流行病學(xué)調(diào)查及線粒體聾病分子機(jī)制的研究.pdf
評論
0/150
提交評論