2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:1、通過檢測線粒體肌病/腦肌病的線粒體DNA(mtDNA)突變情況,探討線粒體肌病/腦肌病的基因型與臨床表型的關(guān)系。 2、建立和完善實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)合突變阻滯形成系統(tǒng)(RTARMS-qPCR)技術(shù),用于檢測線粒體DNA A3243G突變負(fù)荷,并探討線粒體肌病/腦肌病患者不同組織中突變負(fù)荷的分布情況。 方法: 1、采用聚合酶連反應(yīng)結(jié)合限制性酶切分析(PCR-RFLP)及測序等技術(shù)對45例臨床診斷或疑診線粒

2、體肌病/腦肌病的mtDNA A3302G、A3243G、T3271C、G3460A、A8344G、T8356C、T8993G、G11778A、T14484C、G15257A等突變熱點(diǎn)進(jìn)行篩查,分析突變陽性患者的臨床特點(diǎn)。 2、分別構(gòu)建含線粒體DNA3243位點(diǎn)的野生型(A)和突變型(G)序列的質(zhì)粒,將這兩種質(zhì)粒按一定比例混合構(gòu)建成13個(gè)含有不同A3243G突變負(fù)荷的標(biāo)準(zhǔn)對照,應(yīng)用PCR-限制性片斷多態(tài)性技術(shù)(RFLP)和RT A

3、RMS-qPCR技術(shù)檢測13個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對照及存在A3243G突變的患者及攜帶者的外周血、肌肉、毛發(fā)及尿沉渣等組織的A3243G突變負(fù)荷。 3、用PCR結(jié)合測序的方法對3例臨床確診而無熱點(diǎn)突變的線粒體肌病/腦肌病患者的骨骼肌全長mtDNA進(jìn)行序列分析。 結(jié)果: 1、45例臨床診斷或疑診線粒體肌病/腦肌病患者中8例A3243G異質(zhì)性突變陽性,占全部患者的17.78%,均表現(xiàn)為MELAS,且同一患者的肌肉組織、頭發(fā)、尿沉渣

4、等組織的A3243G突變型比例(突變負(fù)荷)較外周血高。 2、45例擬診線粒體肌病/腦肌病患者均無A3302G、T3271C、G3460A、A8344G、T8356C、T8993G、G11778A、T14484C、G15257A等熱點(diǎn)突變。 3、PCR-RFLP和RT ARMS-qPCR檢測含有不同A3243G突變負(fù)荷的標(biāo)準(zhǔn)對照經(jīng)的突變負(fù)荷均與預(yù)期值呈直線相關(guān),決定系數(shù)分別為R21=0.885、R22=0.991,RT A

5、RMS-qPCR檢測的結(jié)果更接近預(yù)期值:RT ARMS-qPCR檢測A3243G突變陽性患者及攜帶者的突變負(fù)荷比經(jīng)PCR-RFLP檢測的高,且RT ARMS-qPCR比PCR-RFLP更容易檢測出低負(fù)荷的A3243G突變,定量檢測的結(jié)果顯示MELAS患者的肌肉、尿沉渣、頭發(fā)的A3243G突變負(fù)荷均高于外周血。 4、3例臨床確診而無熱點(diǎn)突變的線粒體肌病/腦肌病患者經(jīng)mtDNA全長測序,共發(fā)現(xiàn)一個(gè)異質(zhì)性變異C5961T,5個(gè)同質(zhì)性變

6、異A14071G、C14632T、T1520C、G7600A、G7604A,120例對照均無上述變異。 結(jié)論: 1、mtDNA上的A3243G突變是我國線粒體肌病/腦肌病最常見的突變,基因檢測可以協(xié)助臨床診斷。 2、應(yīng)用RT ARMS-qPCR可以快速、靈敏、準(zhǔn)確地檢測不同組織的A3243G突變及其突變負(fù)荷。 3、異質(zhì)性突變的突變負(fù)荷在不同組織的分布不同,肌肉、尿液和毛發(fā)等組織較外周血高,尿液和毛發(fā)等經(jīng)無

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