線粒體腦肌病一個家系的臨床、病理和分子病理研究.pdf

1、研究背景:
　　 線粒體腦肌病(mitochondrial encephalopathy，ME)是一組因線粒體結(jié)構(gòu)和（或）功能異常所致的以腦和肌肉受累為主的多系統(tǒng)疾病。有文獻(xiàn)報告其發(fā)病率約為10-15/10萬人。按照癥狀學(xué)可分為:①慢性進(jìn)行性眼外肌麻痹(CPEO);②線粒體腦肌病伴乳酸酸中毒與卒中樣發(fā)作(MELAS);③肌陣孿性癲癇伴破碎紅纖維(MERRF)④Kearne-Sayre綜合征(KSS)等。CPEO和KSS的病因主要

2、為線粒體DNA的各種長度缺失，多為散發(fā);而MELAS和MERRF的病因多為線粒體DNA的點(diǎn)突變，為母系遺傳。線粒體腦肌病的的基因型和臨床表型間的關(guān)系十分復(fù)雜，同一基因突變可導(dǎo)致多種臨床表型，而同一種臨床綜合征又可以由不同的基因突變所致。探討線粒體腦肌病臨床表型與基因型間的關(guān)系對解釋疾病的發(fā)病機(jī)制及尋找治療途徑具有重要意義。
　　 目的:
　　 對一例線粒體腦肌病患者的臨床特征、肌肉活檢病理特點(diǎn)以及線粒體基因突變類型進(jìn)行分

3、析，同時對患者及家族中的其他成員進(jìn)行了線粒體基因的突變篩查。
　　 對象與方法
　　 研究對象為2011年06月在山東大學(xué)齊魯醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院治療的一名癲癇患者。該患者臨床表現(xiàn)為頻繁發(fā)生的肌陣攣、反復(fù)卒中樣發(fā)作以及小腦性共濟(jì)失調(diào)體征，臨床擬診為MELAS和MERRF疊加綜合征。對該患者臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果、影像學(xué)（顱腦CT和MRI）改變和肌活檢病理特點(diǎn)進(jìn)行分析。同時，提取該患者及其母親和胞妹的外周血或肌肉組織、尿沉渣

4、細(xì)胞及口腔黏膜細(xì)胞內(nèi)的DNA，行PCR擴(kuò)增直接測序或應(yīng)用PCR-RFLP技術(shù)檢測患者及其母親和胞妹可能的基因突變。
　　 結(jié)果:
　　 1.患者為17歲女性，自幼生長發(fā)育正常，于14歲時首次出現(xiàn)癲癇發(fā)作同時伴有肌陣攣，眼球震顫、步基增寬、行走不穩(wěn)和意向性震顫等小腦性共濟(jì)失調(diào)體狀。腦電圖結(jié)果高度不正常，顯示額顳部為著的單個及陣發(fā)性中至極高幅的棘波及棘慢復(fù)合波，符合肌陣攣癲癇的腦電圖改變。具有MERRF的核心癥狀和體征;同時

5、患者有劇烈頭痛、嘔吐，偏身感覺異常，輕偏癱，偏盲等卒中樣癥狀，血乳酸水平明顯升高，頭顱CT示雙側(cè)基底節(jié)鈣化，顱腦MRI示:右側(cè)的枕葉、顳葉不符合單個血管受損表現(xiàn)的長T1、長T2信號，病灶以皮層受損為主。在一次發(fā)熱后，患者再次出現(xiàn)卒中樣發(fā)作，表現(xiàn)為視力突然喪失無光感，突發(fā)頭痛，頭顱MRI發(fā)現(xiàn)左側(cè)的枕葉、顳葉也出現(xiàn)類似上次發(fā)作的病灶，同時上一次的病灶基本消失，上述表現(xiàn)又符合MELAS的臨床特征。
　　 患者母親除身材瘦小外無神經(jīng)科癥

6、狀、體征。患者胞妹，6個月，目前未發(fā)現(xiàn)神經(jīng)科癥狀、體征。
　　 2.患者肌活檢病理所見:H&E染色示肌纖維大小中度不等，可見較多嗜堿性纖維;MGT染色中存在大量RRFs，約占10％，SDH染色可見大量RBFs和數(shù)條SSVs; COX染色有大量酶活性缺失纖維;S/C雙染中發(fā)現(xiàn)大量藍(lán)纖維，ORO染色中可見到輕度的脂滴增多等典型線粒體疾病的肌肉病理改變。
　　 3.患者及其母親的外周血DNA均攜帶mt.3291T＞C點(diǎn)突變，突

7、變比例分別為72％和6％;對患者的肌肉組織DNA、患者母親和胞妹的尿沉渣細(xì)胞及口腔黏膜細(xì)胞DNA進(jìn)行目的片段擴(kuò)增，限制性內(nèi)切酶MIuCI酶切，瓊脂糖凝膠分離MIuCI酶切產(chǎn)物，發(fā)現(xiàn)患者的肌肉、患者母親的尿沉渣及患者胞妹的口腔黏膜上皮細(xì)胞均存在mt.3291T＞C點(diǎn)突變。
　　 結(jié)論:
　　 1.本例患者（先證者）同時具有MELAS和MERRF的典型臨床特征、實(shí)驗(yàn)室檢查、影像學(xué)檢查及肌肉活檢病理特點(diǎn)，符合MELAS/MER

8、RF疊加綜合征的臨床表現(xiàn)。
　　 2.本例患者及其母親和胞妹均發(fā)現(xiàn)mt.3291T＞C點(diǎn)突變，未見其他致病性突變。結(jié)合文獻(xiàn)報道，該突變?yōu)楸炯蚁祷颊叩闹虏⊥蛔儭?br>　　 3.本例患者mt.3291T＞C點(diǎn)突變致MELAS/MERRF疊加綜合征為國內(nèi)外首次報道。
　　 4.mt.3291T＞C點(diǎn)突變可導(dǎo)致多種臨床表型，包括單純肌病，智能障礙合并聽力減退，MERRF， MELAS/MERRF疊加綜合征以及無癥狀的攜帶者。