浙南地區(qū)兒童RSV分子流行病學(xué)特征及與下呼吸道感染病情的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　1.對(duì)2011年7月至2014年6月浙南地區(qū)兩家三甲醫(yī)院因RSV下呼吸道感染住院的5歲以下患兒鼻咽分泌物檢測(cè)的RSV進(jìn)行亞型及基因型分型，探討浙南地區(qū)RSV G和F蛋白基因進(jìn)化及遺傳變異特征。
　　2.闡明浙南地區(qū)RSV分子流行病學(xué)特征及RSV亞型、基因型與疾病嚴(yán)重程度的關(guān)系。
　　方法:
　　1.研究對(duì)象:2011年7月～2014年6月因RSV下呼吸道感染入住溫州醫(yī)科大學(xué)醫(yī)院附屬第二醫(yī)院及麗水市中心

2、醫(yī)院5歲以下的患兒，直接免疫熒光法檢測(cè)鼻咽分泌物，采用SPSS隨機(jī)抽樣的方法每個(gè)流行年度抽取RSV抗原陽(yáng)性標(biāo)本200株，共計(jì)600株。
　　2.RSV-RNA提取:采用病毒快速提取試劑盒提取RSV RNA用于反轉(zhuǎn)錄，剩余部分存于-80℃冰箱。
　　3.RT-PCR擴(kuò)增目的基因:采用TaKara反轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，擴(kuò)增RSV A、B亞型特異性片段，凝膠電泳判斷RSV亞型。每個(gè)流行年度隨機(jī)抽取A、B亞型各25株應(yīng)用P

3、CR擴(kuò)增RSV G基因N端900bp序列，隨機(jī)抽取A、B亞型各10株應(yīng)用PCR擴(kuò)增F基因N端1100bp做雙向測(cè)序。
　　4.同源性分析及構(gòu)建基因進(jìn)化樹(shù):使用DNAstar軟件，采用Clustal W法對(duì)G和F蛋白核苷酸和氨基酸序列與GenBank中代表株做同源性比較;使用MEGA6.06軟件采用N-J法繪制基因進(jìn)化樹(shù)并分析。
　　5.收集RSV感染患兒的臨床信息，包括一般資料、現(xiàn)病史、既往史、出生史、癥狀、體征、診斷等，研

4、究RSV不同亞型及基因型感染所致疾病嚴(yán)重程度的差異。
　　結(jié)果:
　　1.600例RSV感染患兒中男416例，女184例;＜6個(gè)月324例(54％)，6月～2歲230例(38％)，2～5歲46例(8％)。516例(86％)感染發(fā)生在冬春季，其中490例(81.7％)感染發(fā)生在11月至次年3月。
　　2.600份RSV陽(yáng)性標(biāo)本中檢出A亞型268株(44.7％)，B亞型332株(55.3％)，其中2011/2012檢出A亞

5、型169株(84.5％)，2012/2013檢出B亞型162株(81.0％)，2013/2014檢出B亞型139株(69.5％)，3個(gè)流行年度RSV優(yōu)勢(shì)亞型分別為A-B-B。
　　3.測(cè)序共得到35株A亞型和45株B亞型的G基因序列，基因型分別為NA1、ON1、NA4、BA9、BA8、CB1;優(yōu)勢(shì)基因型為2011/2012年度NA118株(94.7％)、BA95株(71.4％);2012/2013年度NA17株(100％)、BA9

6、18株(85.6％);2013/2014年度ON19株(100％)、BA917株(100％)。A亞型G蛋白基因序列與標(biāo)準(zhǔn)株A2核苷酸及氨基酸的同源性分別為85.0％89.7％，81.0％-84.8％;B亞型G基因與標(biāo)準(zhǔn)株CH18537株核苷酸及氨基酸的同源性分別為89.8％-91.9％，81.0％-84.5％。
　　4.測(cè)序得到8株A和9株B亞型F基因序列，F(xiàn)基因在A、BⅡ型間高度保守，僅有堿基的突變，無(wú)缺失、插入及框移突變;在C

7、TLs表位HLA-B*57和HLA-A*01位點(diǎn)均未發(fā)生突變;8株A亞型F蛋白均發(fā)生N276S突變，9株B亞型F276位點(diǎn)均無(wú)突變。
　　5.A亞型感染輕度226例(84.3％)，重度42例(15.7％);BⅡ型感染輕度289例(87.0％)，重度43例(13.0％)，不同亞型之間疾病嚴(yán)重程度差異無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（x2=0.902，P=0.349）;但不同基因型感染所致疾病嚴(yán)重程度有所不同，其中NA1較BA9感染病情更嚴(yán)重（P＜0

8、.05）。
　　結(jié)論:
　　1.浙南地區(qū)RSV感染男性多于女性，好發(fā)于冬春季，高峰時(shí)間為11月至次年3月。
　　2.2011-2014連續(xù)3個(gè)流行年度的優(yōu)勢(shì)亞型分別為A-B-B;2011/2012及2012/2013年度A、B亞型的優(yōu)勢(shì)基因型均為NA1和BA9，2013/2014年度則分別為ON1和BA9。
　　3.RSV G蛋白基因存在不同程度的變異，F(xiàn)基因也發(fā)生著緩慢的突變。F蛋白基因N276S的突變可能是自