人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)急性閉塞性細(xì)支氣管炎小鼠的療效及機(jī)制.pdf

1、第一部分閉塞性細(xì)支氣管炎小鼠急性期模型的建立
　　目的：探討閉塞性細(xì)支氣管炎（Bonchiolitis Oliterans,BO）小鼠急性期模型的建立方法。
　　方法：將C57BL/6小鼠(6～8w，雄性，SPF級(jí))隨機(jī)分兩組：對(duì)照組（n=6）和BO組（n=6）。BO組小鼠氣管內(nèi)滴注2,3-丁二酮（DA）（490 mg/mL即500 mg/kg）1次，對(duì)照組的氣管內(nèi)滴注消毒ddH2O，其余的實(shí)驗(yàn)條件、方法均相同。小鼠飼養(yǎng)于動(dòng)

2、物房（SPF級(jí)），至第3d和第7d收集支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid，BALF)、左肺組織。觀察小鼠一般狀態(tài)、體質(zhì)量，檢測(cè)氣道反應(yīng)性（Airway Hyper Reactivity，AHR）。BALF進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)、分類(lèi)計(jì)數(shù)，左肺行HE染色。
　　結(jié)果：BO組小鼠給予DA后1 d可出現(xiàn)喘息、呼吸增快等表現(xiàn)，監(jiān)測(cè)體質(zhì)量顯著較對(duì)照組降低(P＜0.05)。與對(duì)照組相比，BO組小鼠霧化Mch（濃度

3、為50 mg/mL）時(shí)增強(qiáng)呼氣間歇(Enhanced Pause，Penh)值明顯升高(P＜0.05)。BO組小鼠的BALF中的炎性細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示：第3d時(shí)中性粒細(xì)胞的總數(shù)較對(duì)照組明顯升高(P＜0.05)，第7d時(shí)巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的總數(shù)較對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)。HE染色顯示，3d時(shí)BO組小鼠的細(xì)支氣管腔內(nèi)、管腔周?chē)?rùn)了大量的炎性細(xì)胞，管腔閉塞嚴(yán)重，急性期組織出血較嚴(yán)重；7d BO組小鼠的基底細(xì)胞嚴(yán)重壞死，氣道上皮細(xì)胞（Airw

4、ay epithelial cells，AEC）雖然附著于基底，但可見(jiàn)細(xì)胞明顯有增生肥大，細(xì)胞核丟失較嚴(yán)重，管腔內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，管腔壁增厚，類(lèi)似纖維化的表現(xiàn)。
　　結(jié)論：C57BL/6小鼠給予氣管內(nèi)滴注DA(500 mg/kg)1次，可于第7d觀察到典型的急性期BO改變，建立BO小鼠急性期模型成功。
　　第二部分人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞干預(yù)急性閉塞性細(xì)支氣管炎小鼠的療效及機(jī)制
　　目的：觀察人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（HUC-MS

5、Cs）干預(yù)BO小鼠模型的療效及其可能機(jī)制。
　　方法：將C57BL/6小鼠分為5組（n=8）：①Control+NaCl（空白對(duì)照）組，②Control+HUC-MSC（安全性對(duì)照）組，③BO+NaCl（實(shí)驗(yàn)）組，④BO+HUC-MSCs（干細(xì)胞治療）組，⑤BO+HUC-MSCs-CM（條件培養(yǎng)基治療）組。每組于造模后1h分別尾靜脈注入NaCl、HUC-MSCs、HUC-MSCs-CM（總體積均為200ul）等。Dil標(biāo)記HUC-

6、MSCs，尾靜脈注入，并示蹤其在小鼠肺組織的分布及轉(zhuǎn)移。觀察一般情況，監(jiān)測(cè)體質(zhì)量，并于第3天和第7天收集小鼠的BALF、氣管和左肺；監(jiān)測(cè)肺功能；進(jìn)行HE染色。組織熒光檢測(cè)氣管內(nèi)E-cadherin、CK-5表達(dá)；細(xì)胞熒光檢測(cè)HUC-MSCs中E-cadherin、CK-5的表達(dá)；Dil體外標(biāo)記HUC-MSCs及體內(nèi)示蹤。
　　結(jié)果：HUC-MSCs干預(yù)BO小鼠后可明顯降低其死亡率（P＜0.05)。肺組織病理學(xué)可見(jiàn)BO+HUC-MS

7、Cs組、BO+HUC-MSCs-CM組于第3、7d AEC、基底細(xì)胞明顯修復(fù)，肺泡及支氣管周?chē)难装Y細(xì)胞明顯減少、肺泡間隔縮小，急性出血減少。氣管內(nèi)熒光顯示：AEC的E-cadherin、CK-5表達(dá)較實(shí)驗(yàn)組明顯升高（P＜0.05)。HUC-MSCs細(xì)胞熒光可以看出其自身并不表達(dá)E-cadherin、CK-5。Dil可以在體外高效的標(biāo)記HUC-MSCs，HUC-MSCs在氣管內(nèi)2d、肺組織4d后消失。
　　結(jié)論：HUC-MSCs可