人臍帶間充質(zhì)干細胞干預急性閉塞性細支氣管炎小鼠的療效及機制.pdf

1、第一部分閉塞性細支氣管炎小鼠急性期模型的建立
　　目的：探討閉塞性細支氣管炎（Bonchiolitis Oliterans,BO）小鼠急性期模型的建立方法。
　　方法：將C57BL/6小鼠(6～8w，雄性，SPF級)隨機分兩組：對照組（n=6）和BO組（n=6）。BO組小鼠氣管內(nèi)滴注2,3-丁二酮（DA）（490 mg/mL即500 mg/kg）1次，對照組的氣管內(nèi)滴注消毒ddH2O，其余的實驗條件、方法均相同。小鼠飼養(yǎng)于動

2、物房（SPF級），至第3d和第7d收集支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar Lavage Fluid，BALF)、左肺組織。觀察小鼠一般狀態(tài)、體質(zhì)量，檢測氣道反應性（Airway Hyper Reactivity，AHR）。BALF進行細胞計數(shù)、分類計數(shù)，左肺行HE染色。
　　結(jié)果：BO組小鼠給予DA后1 d可出現(xiàn)喘息、呼吸增快等表現(xiàn)，監(jiān)測體質(zhì)量顯著較對照組降低(P＜0.05)。與對照組相比，BO組小鼠霧化Mch（濃度

3、為50 mg/mL）時增強呼氣間歇(Enhanced Pause，Penh)值明顯升高(P＜0.05)。BO組小鼠的BALF中的炎性細胞計數(shù)顯示：第3d時中性粒細胞的總數(shù)較對照組明顯升高(P＜0.05)，第7d時巨噬細胞、淋巴細胞的總數(shù)較對照組顯著升高(P＜0.05)。HE染色顯示，3d時BO組小鼠的細支氣管腔內(nèi)、管腔周圍浸潤了大量的炎性細胞，管腔閉塞嚴重，急性期組織出血較嚴重；7d BO組小鼠的基底細胞嚴重壞死，氣道上皮細胞（Airw

4、ay epithelial cells，AEC）雖然附著于基底，但可見細胞明顯有增生肥大，細胞核丟失較嚴重，管腔內(nèi)有炎性細胞浸潤，管腔壁增厚，類似纖維化的表現(xiàn)。
　　結(jié)論：C57BL/6小鼠給予氣管內(nèi)滴注DA(500 mg/kg)1次，可于第7d觀察到典型的急性期BO改變，建立BO小鼠急性期模型成功。
　　第二部分人臍帶間充質(zhì)干細胞干預急性閉塞性細支氣管炎小鼠的療效及機制
　　目的：觀察人臍帶間充質(zhì)干細胞（HUC-MS

5、Cs）干預BO小鼠模型的療效及其可能機制。
　　方法：將C57BL/6小鼠分為5組（n=8）：①Control+NaCl（空白對照）組，②Control+HUC-MSC（安全性對照）組，③BO+NaCl（實驗）組，④BO+HUC-MSCs（干細胞治療）組，⑤BO+HUC-MSCs-CM（條件培養(yǎng)基治療）組。每組于造模后1h分別尾靜脈注入NaCl、HUC-MSCs、HUC-MSCs-CM（總體積均為200ul）等。Dil標記HUC-

6、MSCs，尾靜脈注入，并示蹤其在小鼠肺組織的分布及轉(zhuǎn)移。觀察一般情況，監(jiān)測體質(zhì)量，并于第3天和第7天收集小鼠的BALF、氣管和左肺；監(jiān)測肺功能；進行HE染色。組織熒光檢測氣管內(nèi)E-cadherin、CK-5表達；細胞熒光檢測HUC-MSCs中E-cadherin、CK-5的表達；Dil體外標記HUC-MSCs及體內(nèi)示蹤。
　　結(jié)果：HUC-MSCs干預BO小鼠后可明顯降低其死亡率（P＜0.05)。肺組織病理學可見BO+HUC-MS

7、Cs組、BO+HUC-MSCs-CM組于第3、7d AEC、基底細胞明顯修復，肺泡及支氣管周圍的炎癥細胞明顯減少、肺泡間隔縮小，急性出血減少。氣管內(nèi)熒光顯示：AEC的E-cadherin、CK-5表達較實驗組明顯升高（P＜0.05)。HUC-MSCs細胞熒光可以看出其自身并不表達E-cadherin、CK-5。Dil可以在體外高效的標記HUC-MSCs，HUC-MSCs在氣管內(nèi)2d、肺組織4d后消失。
　　結(jié)論：HUC-MSCs可