葡萄根癌病生防菌株Agrobacterium vitis E26無致病性的初步研究.pdf

1、葡萄根癌病是由葡萄土壤桿菌(Agrobacterium vitis)引起的世界性病害，在生產(chǎn)上能夠造成重大經(jīng)濟損失。葡萄土壤桿菌E26菌株(A.vitis E26)無致病性，是一株有應用前景的根癌病生防菌株。前期研究表明，E26菌株可能存在一個與根癌土壤桿菌C58(A.tumefaciens C58)的Ti質粒(pTiC58)大小近似、部分DNA序列同源的質粒；該質?？赡苋笔Я藀TiC58的關鍵致瘤基因。本研究運用PCR和Souther

2、n雜交相結合的方法對E26菌株中是否存在土壤桿菌致病菌株中所存在的部分關鍵致瘤基因進行檢測。 根據(jù)部分土壤桿菌致病菌株中存在的關鍵致瘤基因(virA，virG，iaaH,iaaM和ipt)各自的保守序列分別設計引物，以E26菌株基因組DNA為模板，PCR擴增結果均為陰性。根據(jù)A.vitisS4的virA，virG，iaaM和枷及A.vitis K308的iaaH的保守序列分別合成探針，與E26菌株基因組DNA進行Southern

3、雜交，結果均為陰性。根據(jù)A.tumefaciens C58的virA，virG和iaaM的保守序列分別合成探針，與E26菌株基因組DNA進行Southem雜交，結果也均為陰性。 根據(jù)致病菌株A.vitis CG49的引起葡萄根部壞死相關基因pehA(編碼多聚半乳糖醛酸酶)和生防菌株A. vitis F2/5的趨化性相關基因chvA(編碼β-1-2-葡聚糖運輸?shù)鞍?的DNA序列分別設計引物，通過PCR，克隆到E26菌株中的同源基因

4、，分別命名為pehA<,E26>和chVA<,E26>。在核苷酸序列水平上，pehA<,E26>和pehA<,CG49>有92％的相似性，chVA<,E26>和chvA<,F2/5>有94％的相似性；在氨基酸序列水平上，PehA<,E26>和PehA<,CG49>有94％的相似性，ChvA<,E26>和ChvA<,F2/5>有98％的相似性。pehA<,E26>和chvA<,E26>撕基因的功能有待進一步研究確認。 本研究初步證