水生拉恩氏菌HX2菌株防治葡萄根癌病的初步研究.pdf

1、葡萄根癌病是由葡萄土壤桿菌(Agrobacterium vitis)引起的一種在生產(chǎn)上造成了較大經(jīng)濟(jì)損失的世界性病害。HX2菌株是很有應(yīng)用前景的生防菌株。本研究系統(tǒng)分析和研究了HX2菌株防治根癌病的相關(guān)性狀及其作用機(jī)理。
　　 HX2菌株對(duì)根癌土壤桿菌(Agrobacterium tumefaciens)、發(fā)根土壤桿菌(A.rhizogenes)、葡萄土壤桿菌(A.vitis)三個(gè)種的21個(gè)菌株；水稻白葉枯病菌(Xanthomo

2、nas oryzae pv.oryzae)、棉花細(xì)菌性角斑病菌(Xanthomonas campestris pv.malvacearum)、甘藍(lán)黑腐病菌(Xanthomonas campestripv.campestri)、黃瓜細(xì)菌性角斑病菌(Pseudomonas lachrymans)、番茄潰瘍病菌(Clavibactermichiganense subsp.michiganensis)和枯草芽孢桿菌(Bacillus subti

3、lis)等植物病原細(xì)菌的代表菌株；黃瓜枯萎病菌(Fusarium orysporum f.sp.cucumerinum)、西瓜枯萎病菌(Fusarium orysporum f.sp.niveum)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)和番茄早疫病菌(Alternaria solani)等植物病原真菌及金黃色葡萄球菌(Staphlococcus aureus)均具有平板抑制效果。表明HX2菌株具有較為廣泛的抑菌譜。在溫室中以

4、向日葵為指示植物，HX2菌株對(duì)由土壤桿菌屬三個(gè)種的21個(gè)菌株引起的根癌病均有不同程度的防治效果。在溫室葡徇活體植株上，HX2菌株菌體和上清液對(duì)由A.vitis K308引起的冠癭瘤的形成均有不同程度的抑制作用，但發(fā)酵液上清液的防效優(yōu)于菌體的防效。大田試驗(yàn)中，HX2菌株對(duì)由A.vitis K308引起的葡萄根癌病有良好的防治效果，應(yīng)用HX2菌株處理的葡萄植株根癌病的發(fā)病率及病情指數(shù)均有顯著性降低，防效達(dá)到80.2％。
　　 通過(guò)部

5、分生理生化特性和BIOLOG代謝指紋及16S rDNA序列測(cè)定和分析，鑒定HX2菌株為水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis)。應(yīng)用質(zhì)粒pSMC21轉(zhuǎn)化HX2菌株感受態(tài)細(xì)胞，獲得了綠色熒光蛋白基因gfp標(biāo)記的HX2菌株。該標(biāo)記菌株能穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光，在生長(zhǎng)速度、產(chǎn)生抗菌物質(zhì)和生防效果等方面與野生型菌株均無(wú)顯著性差異。GFP標(biāo)記示蹤表明HX2菌株在葡萄根表面和根際土壤中存活定殖時(shí)間均可以達(dá)到三個(gè)月；對(duì)土壤微生物群體數(shù)量無(wú)顯著影

6、響；在自然水體中存活能力差。
　　 HX2菌株產(chǎn)生抗菌物質(zhì)的最適培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)表明，在碳源為葡萄糖、氮源為有機(jī)氮的培養(yǎng)基中能產(chǎn)生大量的抗菌物質(zhì)。HX2菌株抗菌物質(zhì)產(chǎn)生的適合培養(yǎng)條件為：28℃，初始pH為8.0，裝瓶量為30％，震蕩培養(yǎng)16 h。從HX2菌株發(fā)酵液中分離提取并部分純化了抗菌物質(zhì)，物理和化學(xué)性質(zhì)表明它可能是一種含有糖類基團(tuán)的非蛋白和非酚類的極性小分子物質(zhì)。該抗菌物質(zhì)粗提物具有良好的熱穩(wěn)定性，對(duì)部分蛋白酶及RNase不