甘氨酸對燒傷大鼠失控炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用及機制研究.pdf

1、燒傷膿毒癥是嚴重燒傷的常見并發(fā)癥，起病急，進展快，可誘發(fā)SIRS和MODS，是燒傷死亡的主要原因之一。最近證實，甘氨酸可通過其調(diào)控的Cl-通道促進Cl-內(nèi)流引起細胞膜超極化，抑制枯否細胞、中性粒細胞等的活性，從而改善LPS等因素引起的抗炎/致炎免疫失衡，以對抗可能發(fā)生的SIRS及MODS。 目的：探討燒傷大鼠應(yīng)用甘氨酸拮抗內(nèi)毒素調(diào)控過度炎癥反應(yīng)的作用及機制。 方法： 1.實驗動物造模及分組：Wistar大鼠96只

2、(北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心)，雌雄不拘：大鼠造成20％深I(lǐng)I度以上燒傷，傷后6h腹腔注射乳酸鈉林格氏液(40ml/kg)延遲復(fù)蘇，復(fù)蘇后3h腹腔注射LPS溶液10mg/kg，治療組在LPS攻擊的同時分別給予Gln溶液或Gly溶液1g/3ml灌胃(日本味之素公司)。于相應(yīng)時相點活殺動物，留取血液標本。造模后將動物按實驗設(shè)計隨機分為4組：單純燒傷組(A組)；燒傷合并膿毒癥組(B組)；燒傷合并膿毒癥、谷氨酰胺治療組(C組)；燒傷合并膿毒

3、癥、甘氨酸治療組(D組)，每組再分為四個亞組，即傷后3h、6h、12h、24h，各時相點n=6。 2.炎性細胞因子測定：采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)法檢測各組大鼠血漿炎癥細胞因子TNF-α、抗炎因子IL-10水平，并計算各時相點TNF-α/IL-10值； 采用鱟實驗基質(zhì)顯色定量測定法測定各處理組大鼠血漿LPS水平。 3.PMФ的制備：Wister大鼠腹腔內(nèi)注射Hank’s液20ml，開腹吸出灌洗液。離心、棄

4、上清，用RPMI-1640(10％FBS)培養(yǎng)基混懸后，培養(yǎng)4h(5％CO2，37℃)。棄培養(yǎng)基，再加入新鮮RPMI-1640(10％FBS)培養(yǎng)基，溫育12h待用。 4.單細胞[Ca2+]i的檢測： ①熒光探針的負載：以Fura-2做Ca2+的熒光指示劑。將PM()培養(yǎng)液與負載液配成細胞懸液后靜置50min后，充分沈掉未負載的Fura-2/AM。再于每個樣品槽中加入1ml的m-HBSS液(10％FBS)，待測。

5、 ②[Ca2+]i的檢測：使用單細胞[Ca2+]；熒光圖像分析系統(tǒng)檢測PMφ[Ca2+]i。將負載好的細胞放于倒置顯微鏡的載物臺上避光檢測。用CCD實時拍攝細胞內(nèi)熒光強度動態(tài)變化，Matefluor分析軟件進行實時采集和分析。 結(jié)論： 1.成功復(fù)制20％深I(lǐng)I度大鼠燒傷模型和燒傷后膿毒癥大鼠模型，LPS組各觀察時相點LPS水平顯著高于Burn組。 2.Gly具有拮抗LPS，抑制炎癥介質(zhì)過度釋放，調(diào)控致炎因子與抗炎