甘氨酸對(duì)燒傷大鼠失控炎癥反應(yīng)的調(diào)控作用及機(jī)制研究.pdf

1、燒傷膿毒癥是嚴(yán)重?zé)齻某Ｒ?jiàn)并發(fā)癥，起病急，進(jìn)展快，可誘發(fā)SIRS和MODS，是燒傷死亡的主要原因之一。最近證實(shí)，甘氨酸可通過(guò)其調(diào)控的Cl-通道促進(jìn)Cl-內(nèi)流引起細(xì)胞膜超極化，抑制枯否細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等的活性，從而改善LPS等因素引起的抗炎/致炎免疫失衡，以對(duì)抗可能發(fā)生的SIRS及MODS。 目的：探討燒傷大鼠應(yīng)用甘氨酸拮抗內(nèi)毒素調(diào)控過(guò)度炎癥反應(yīng)的作用及機(jī)制。 方法： 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造模及分組：Wistar大鼠96只

2、(北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，雌雄不拘：大鼠造成20％深I(lǐng)I度以上燒傷，傷后6h腹腔注射乳酸鈉林格氏液(40ml/kg)延遲復(fù)蘇，復(fù)蘇后3h腹腔注射LPS溶液10mg/kg，治療組在LPS攻擊的同時(shí)分別給予Gln溶液或Gly溶液1g/3ml灌胃(日本味之素公司)。于相應(yīng)時(shí)相點(diǎn)活殺動(dòng)物，留取血液標(biāo)本。造模后將動(dòng)物按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)隨機(jī)分為4組：?jiǎn)渭儫齻M(A組)；燒傷合并膿毒癥組(B組)；燒傷合并膿毒癥、谷氨酰胺治療組(C組)；燒傷合并膿毒

3、癥、甘氨酸治療組(D組)，每組再分為四個(gè)亞組，即傷后3h、6h、12h、24h，各時(shí)相點(diǎn)n=6。 2.炎性細(xì)胞因子測(cè)定：采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)各組大鼠血漿炎癥細(xì)胞因子TNF-α、抗炎因子IL-10水平，并計(jì)算各時(shí)相點(diǎn)TNF-α/IL-10值； 采用鱟實(shí)驗(yàn)基質(zhì)顯色定量測(cè)定法測(cè)定各處理組大鼠血漿LPS水平。 3.PMФ的制備：Wister大鼠腹腔內(nèi)注射Hank’s液20ml，開(kāi)腹吸出灌洗液。離心、棄

4、上清，用RPMI-1640(10％FBS)培養(yǎng)基混懸后，培養(yǎng)4h(5％CO2，37℃)。棄培養(yǎng)基，再加入新鮮RPMI-1640(10％FBS)培養(yǎng)基，溫育12h待用。 4.單細(xì)胞[Ca2+]i的檢測(cè)： ①熒光探針的負(fù)載：以Fura-2做Ca2+的熒光指示劑。將PM()培養(yǎng)液與負(fù)載液配成細(xì)胞懸液后靜置50min后，充分沈掉未負(fù)載的Fura-2/AM。再于每個(gè)樣品槽中加入1ml的m-HBSS液(10％FBS)，待測(cè)。

5、 ②[Ca2+]i的檢測(cè)：使用單細(xì)胞[Ca2+]；熒光圖像分析系統(tǒng)檢測(cè)PMφ[Ca2+]i。將負(fù)載好的細(xì)胞放于倒置顯微鏡的載物臺(tái)上避光檢測(cè)。用CCD實(shí)時(shí)拍攝細(xì)胞內(nèi)熒光強(qiáng)度動(dòng)態(tài)變化，Matefluor分析軟件進(jìn)行實(shí)時(shí)采集和分析。 結(jié)論： 1.成功復(fù)制20％深I(lǐng)I度大鼠燒傷模型和燒傷后膿毒癥大鼠模型，LPS組各觀察時(shí)相點(diǎn)LPS水平顯著高于Burn組。 2.Gly具有拮抗LPS，抑制炎癥介質(zhì)過(guò)度釋放，調(diào)控致炎因子與抗炎