高烏甲素對燒傷SIRS大鼠的鎮(zhèn)痛作用及機制.pdf

1、目的：1.明確高烏甲素（Lappaconitine LA）對重度燒傷全身炎性反應綜合征（Systemic Inflammatory response syndrome SIRS）大鼠的鎮(zhèn)痛效果；求證LA通過抑制脊髓背角小膠質(zhì)細胞P2X4受體表達產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用；同時可減少炎癥因子釋放，減輕SIRS所致過度炎性狀態(tài)。
　　方法：實驗分為兩部分；第一部分：應用成年雄SD大鼠32只，隨機分為為A、B、C、D四組，每組8只，建立重度燒傷模型。

2、燒傷48h后行鞘內(nèi)注射，A組鞘內(nèi)注入10μl生理鹽水，B組注入TNP-ATP(30 nmol，10μl)，C組注入minocycline（50μg，10μl）， D組注入PPADS lOμl(10 nmoL／l)。注射后觀察大鼠行為學有無異常，并于注射前、后30min測量大鼠MWT。第二部分。應用成年雄SD大鼠80只隨機分為正常對照組、假燒傷組、燒傷組、燒傷+LA組、正常+LA組，共5組，每組24只。建立重度燒傷SIRS模型。其中燒傷+

3、LA組、正常+LA組于燒傷前2h、燒傷后12、24、36、48、72h腹腔注射LA（6mg/kg）。觀察建模后、LA治療過程中各組大鼠疼痛行為學改變，并用電子von Fray纖維檢測機械刺激縮腿反射閾值（Mechanical withdrawal threshold MWT）的變化（燒傷前2h、燒傷后12、24、36、48、72h）。燒傷后48h時間點免疫熒光雙標明確P2X4受體與OX-42受體在脊髓背角處的共表達情況。免疫組織化學法檢

4、測各組大鼠脊髓背角（L4-6）P2X4受體蛋白表達變化；酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immunosorbent assay ELISA）各組大鼠血清中TNF-α、IL-1β在48h時間點表達水平。
　　結(jié)果：第一部分結(jié)果顯示：燒傷大鼠鞘內(nèi)微量注射小膠質(zhì)細胞活化抑制劑minocycline后30min觀察大鼠MWT較前顯著提高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）；鞘內(nèi)微量注射P2X1-4受體拮抗劑TNP-ATP后3

5、0min測燒傷大鼠MWT較注射前顯著提高,差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）；鞘內(nèi)微量注射以及P2X1,2,3,5,7受體拮抗劑PPADS后30min測燒傷大鼠MWT無明顯改變，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。第二部分結(jié)果顯示：MWT及免疫組化結(jié)果示：燒傷組大鼠在重度燒傷SIRS建立后MWT明顯降低，48h達最低，并伴脊髓背角小膠質(zhì)細胞P2X4受體表達上調(diào)，較正常對照組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）；燒傷+LA組大鼠在各時間點檢測

6、MWT與燒傷組相比顯著升高，脊髓背角小膠質(zhì)細胞P2X4受體與燒傷組大鼠比較表達下調(diào)，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。免疫熒光雙標顯示：脊髓背角小膠質(zhì)細胞活化，胞體肥大，表達OX42(綠色)，絕大部分小膠質(zhì)細胞表達有P2X4受體(紅色)。48h時間點ELISA檢測結(jié)果顯示：燒傷組血清炎性因子TNF-α、IL-1β表達顯著增加與對照組差別有統(tǒng)計學意義（P<0.001）；燒傷+LA組血清炎性因子TNF-α、IL-1β的表達量較燒傷組降低，