凋亡抑制蛋白Livin在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、Livin是凋亡抑制蛋白(Inhibitor of Apoptosis Protein，IAP)家族的重要成員，在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，在絕大多數(shù)正常組織中不表達(dá)。Livin是一種能抑制細(xì)胞凋亡的細(xì)胞核蛋白，它能與胱天蛋白酶-3，7，9(caspase-3，7，9)結(jié)合，抑制caspase活性，阻斷死亡信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。由于Livin具有抑制caspase的活性，因而腫瘤細(xì)胞內(nèi)Livin的過(guò)表達(dá)在對(duì)腫瘤細(xì)胞耐受藥物誘導(dǎo)的凋亡過(guò)程中起著關(guān)鍵

2、性作用。本課題組以前通過(guò)RT-PCR的方法從分子水平對(duì)Livin在膀胱移行細(xì)胞癌(Transitional Cell Carcinoma of Bladder，TCC)組織中的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，證明Livin在TCC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到重要的作用。本研究進(jìn)一步從蛋白水平對(duì)livin在TCC中的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，完善對(duì)人體膀胱癌組織的研究。 目的：研究一種新的凋亡抑制蛋白Livin在TCC組織中的表達(dá)，及其與TCC的病理分級(jí)、臨床分期、初

3、發(fā)復(fù)發(fā)和單發(fā)多發(fā)之間的相關(guān)性。 方法：將開(kāi)放手術(shù)切除的標(biāo)本，經(jīng)冷凍、切割、定點(diǎn)選取等處理后，用自制的陣列制作儀，在組織陣列載體上，以一定順序，固定間距制成冰凍組織微陣列。1.采用免疫組織化學(xué)染色(Immunohistochemical staining，IHC) (通用型二步法)，在完全相同的實(shí)驗(yàn)條件下檢測(cè)50例(分為初發(fā)淺表組、初發(fā)浸潤(rùn)組、復(fù)發(fā)淺表組、復(fù)發(fā)浸潤(rùn)組和正常對(duì)照組，每組各10例)冰凍標(biāo)本中Livin的表達(dá)情況。2.采

4、用Western blotting及蛋白灰度分析的方法，對(duì)上述50例樣本進(jìn)行定性及半定量檢測(cè)Livin的表達(dá)情況。3.利用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析Livin的表達(dá)與TCC的病理分級(jí)、臨床分期、初發(fā)復(fù)發(fā)和單發(fā)多發(fā)之間的相關(guān)性。 結(jié)果：1、免疫組織化學(xué)：10例正常膀胱組織細(xì)胞中無(wú)livin陽(yáng)性表達(dá)，而40例TCC組織標(biāo)本中有34例livin陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為85％，兩者相比差異具有顯著性(P<0.01)。按WHO病理分級(jí)分組比較發(fā)現(xiàn)Livin蛋白

5、的陽(yáng)性表達(dá)率在不同分級(jí)間差異無(wú)顯著性(P>0。05)。浸澗性組和淺表性組的livin蛋白陽(yáng)性率經(jīng)比較差異具有顯著性(P<0.05)。2、Western boltting：在收集的40例TCC標(biāo)本中有效標(biāo)本37例，其中l(wèi)ivin蛋白表達(dá)陽(yáng)性標(biāo)本35例，陽(yáng)性率為95％；正常對(duì)照組無(wú)livin蛋白表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間差異具有顯著性(P<0.01)。通過(guò)對(duì)35例TCC陽(yáng)性標(biāo)本livin蛋白條帶及其對(duì)應(yīng)的β-actin條帶分別進(jìn)行灰度分析并算

6、出比值后，經(jīng)正態(tài)檢驗(yàn)符合正態(tài)分布，按初發(fā)淺表、初發(fā)浸潤(rùn)、復(fù)發(fā)淺表和復(fù)發(fā)浸潤(rùn)分四組行方差分析，結(jié)果顯示四組之間差異具有顯著性，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=5.926，P=0.003)。說(shuō)明淺表組與浸潤(rùn)組之間、初發(fā)組與復(fù)發(fā)組之間差異具有顯著性。按腫瘤病理分級(jí)和單發(fā)多發(fā)分組分別進(jìn)行方差分析發(fā)現(xiàn)livin的表達(dá)與腫瘤的病理分級(jí)、單發(fā)多發(fā)之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論：本研究通過(guò)使用免疫組化和Western blotting兩種方法，其

7、結(jié)果一致，都說(shuō)明livin在正常膀胱組織中不表達(dá)而在TCC組織中高表達(dá)，且淺表組與浸潤(rùn)組、初發(fā)組與復(fù)發(fā)組之間差異具有顯著性，而在病理分級(jí)分組之間、單發(fā)多發(fā)分組之間無(wú)顯著性差異。證明Livin在TCC的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著相當(dāng)重要的作用，在膀胱癌的治療過(guò)程中，livin有望成為一種高效、敏感的瘤標(biāo)，并且能對(duì)TCC的早期治療提供基因治療的新靶點(diǎn)。更重要的是對(duì)Livin進(jìn)行檢測(cè)可以了解患者的預(yù)后情況，有重點(diǎn)的對(duì)livin高表達(dá)的患者及早進(jìn)行更全