凋亡抑制蛋白livin在急性白血病中的表達及其臨床意義.pdf

1、第一部分Livin在急性白血病的表達和臨床意義 [目的] 檢測livinmRNA在急性白血病(AL)患者和正常人中的表達情況，觀察livin在急性淋巴細胞性白血病(ALL)、急性非淋巴細胞性白血病(ANLL)和正常人的表達差異，并分析探討livin表達與AL的誘導化療完全緩解率(CR)的關系。 [方法] 隨機選擇50例符合FAB診斷標準的初發(fā)AL患者，采集其骨髓或外周血(幼稚細胞較高時)單個核細胞，提取總

2、mRNA，用RT-PCR法檢測患者化療前和6例正常對照者的livinmRNA表達水平，并對所得結果進行統(tǒng)計學分析，比較livin在ALL與ANLL之間、ALL和ANLL與正常人之間表達有無顯著差異性。收集患者臨床資料，分析其誘導化療效果及其與livin表達的關系。 [結果] 在正常人中，1ivinmRNA表達陽性率僅為16.7％。50例AL患者中41例livinmRNA表達陽性(82.0％)。19例ALL患者中17例細胞

3、1ivinmRNA表達陽性(89.4％)。31例ANLL患者中24例livinmRNA表達陽性(77.4％)。在ALL和ANLL細胞中，1ivinmRNA表達陽性率均明顯高于正常對照組(P值均＜0.01)。Livin的表達水平與AL誘導化療CR率成負相關。特別在急性淋巴細胞性白血病中，1ivin表達上調的病例其誘導化療緩解率(CR率)較低。 [結論] Livin在多數(shù)急性白血病患者中表達上調，livin在ALL中的高表達

4、提示誘導緩解率較低。Livin可以作為判斷ALL預后的新指標，并有可能成為白血病基因治療的新靶點。 第二部分RNA干擾技術沉默K562細胞livin基因的實驗研究 [目的] 觀察小分子RNA干擾技術下調高表達livin的白血病細胞系K562細胞livin基因表達后，K562細胞的自發(fā)凋亡率及K562細胞對化療藥物敏感性的變化，并初步探討其誘導凋亡和增加藥物敏感性的分子機制。 [方法] K562細胞

5、常規(guī)條件下培養(yǎng)至細胞對數(shù)生長期；根據(jù)siRNA設計原則，設計三條針對livin基因的特異干擾序列；化學合成livin基因siRNA及陰性對照(si-neg)，核轉染K562細胞；通過RT-PCR分析轉染前后K562細胞livinmRNA的表達情況；通過WesternBlot檢測轉染前后K562細胞livin蛋白的表達；利用流式細胞儀進行細胞凋亡的分析，觀察轉染及藥物VP-16對K562的誘導凋亡作用；MTT法檢測K562細胞轉染前后對V

6、P-16的敏感性變化；利用酶標儀檢測轉染前后K562細胞Caspase-3的活性變化。 [結果] ①三條siRNA都能在轉錄后水平下調livinmRNA的表達，并進而降低livin蛋白的表達水平；其中以第三條序列的基因沉默效果最明顯。②以siRNA-3為轉染序列，K562細胞轉染后48小時自發(fā)凋亡率為27.41±0.31％，與未轉染組的9.63±0.08％相比，有明顯提高(P＜0.05)；未轉染組，轉染組，單加VP-16

7、組，VP-16和轉染聯(lián)合作用組48小時的凋亡率分別為9.6±0.11％、27.7±0.30％、31.4±0.29％、45.1±0.40％；③轉染siRNA-3后，VP-16對K562細胞的半數(shù)致死量(IC50)由轉染前的10μmol/L下降至5μmol/L④Caspase-3的活性在轉染siRNA-3前后分別為100％和145％。 [結論] RNA干擾技術可以在mRNA水平下調K562細胞livin基因表達，進而影響蛋白