可表達(dá)人CD40Ig融合蛋白的腺病毒載體的構(gòu)建及其誘導(dǎo)大鼠心臟移植免疫耐受的研究.pdf_第1頁
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1、該研究根據(jù)免疫耐受的誘導(dǎo)原理,設(shè)計(jì)和構(gòu)建了可表達(dá)人CD40Ig的腺病毒載體,并在大鼠心臟移植模型中采用CD40Ig基因轉(zhuǎn)染和供者特異性骨髓輸注的方法,研究探討其誘導(dǎo)移植免疫耐受的作用.主要內(nèi)容如下:1.構(gòu)建含有人CD40Ig的Track-CMV-CD40Ig的腺病毒穿梭質(zhì)粒,經(jīng)Pme I酶切線性化后與腺病毒骨架質(zhì)粒Adeasy-1共轉(zhuǎn)化BJ5183大腸桿菌,在細(xì)菌內(nèi)同源重組,獲得重組腺病毒質(zhì)粒pAd/CD40Ig,然后轉(zhuǎn)染293細(xì)胞,在

2、其內(nèi)包裝為完整的腺病毒顆粒.2.用SDS-PAGE電泳和Westernblot免疫印跡的方法,證實(shí)了重組腺病毒的正確性.將病毒載體2x10<'8>PFU經(jīng)尾靜脈注射入大鼠體內(nèi)48小時(shí)后,用ELISA方法可在外周血中檢測(cè)到CD40Ig的表達(dá),兩周左右達(dá)到高峰,并持續(xù)表達(dá)30天以上.3.建立心臟移植模型.采取移植物主動(dòng)脈-受者左頸總動(dòng)脈、移植物肺動(dòng)脈-受者頸外靜脈的方式,將供體心臟移植到受者大鼠的左頸部.4.Ad/CD40Ig單獨(dú)應(yīng)用可以延

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