造血干細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠腎臟移植免疫耐受的研究.pdf

1、目的：
　　 如何誘導(dǎo)供體特異性移植耐受成為解決器官移植排斥反應(yīng)的最佳手段，也成為臨床器官移植免疫學(xué)研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域及主要目標(biāo)之一。本研究通過(guò)大鼠腎臟移植受體在接受低劑量放射線全身照射預(yù)處理后，輸注供體造血干細(xì)胞(HSC)對(duì)腎臟移植受體及移植腎的影響，探討造血干細(xì)胞能否誘導(dǎo)出針對(duì)供者特異性的免疫耐受。
　　 方法：
　　 1、建立支架管置入并固定于腎靜脈代替靜脈吻合大鼠腎臟移植模型：將供。腎動(dòng)脈開(kāi)口端與受體左腎動(dòng)脈

2、作端端吻合，取1cm長(zhǎng)度輸尿管導(dǎo)管作為支架管，置入并固定供受體腎靜脈，輸尿管膀胱瓣與受體膀胱壁吻合。
　　 2、造血干細(xì)胞誘導(dǎo)大鼠腎臟移植免疫耐受：(1)實(shí)驗(yàn)分組：32只受體Wistar大鼠隨機(jī)分為4組，各組8只。A：對(duì)照組；B：造血干細(xì)胞(HSC)+腎移植；C：全身照射(TBI)+腎移植；D：HSC+TBI+腎移植。(2)受體Wistar大鼠術(shù)前接受低劑量放射線全身照射，提取供者造血干細(xì)胞，手術(shù)當(dāng)日經(jīng)尾靜脈推注SD大鼠的造血干

3、細(xì)胞，并當(dāng)天完成腎移植，受體實(shí)驗(yàn)前1天，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，及實(shí)驗(yàn)后1、3、4、5天按10mg/kg口服環(huán)孢素A。(3)觀察各組大鼠的存活時(shí)間，監(jiān)測(cè)血清肌酐濃度，并進(jìn)行移植腎彩色多普勒超聲。移植物病理學(xué)檢查。采用體外混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)法檢測(cè)長(zhǎng)期存活大鼠的免疫耐受狀態(tài)。
　　 結(jié)果：
　　 1、建立模型：共施行大鼠腎移植30例，5例動(dòng)脈吻合處有少量出血，棉球壓迫5min后2例出血停止，3例因吻合處出血于術(shù)后1-3h死亡(尸體

4、解剖證實(shí))，2例因術(shù)中動(dòng)脈吻合口狹窄死亡，2例因麻醉過(guò)量呼吸抑制于術(shù)中死亡，成功率為76.7％。
　　 2、存活時(shí)間：D組平均存活時(shí)間為58.9d，與A組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。D組與B組及C組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3、移植腎功能測(cè)定：A組術(shù)后3d切除自體腎臟后，血清肌酐濃度迅速上升；B組及C組血清肌酐濃度呈現(xiàn)緩慢上升趨勢(shì)，D組的移植腎功能基本保持穩(wěn)定。
　　 4、病理學(xué)

5、結(jié)果：對(duì)照組移植腎腎間質(zhì)水腫，并有淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，多見(jiàn)于間質(zhì)小血管周圍，腎小管上皮細(xì)胞變性壞死、脫落，血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，有纖維素樣壞死并可見(jiàn)微血栓形成。B組和C組未見(jiàn)急性排斥反應(yīng)，腎間質(zhì)水腫不明顯，見(jiàn)少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。腎小管上皮細(xì)胞變性壞死、脫落，血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹不明顯。同期D組未見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小管上皮細(xì)胞未見(jiàn)變性壞死、脫落。無(wú)微血栓形成。
　　 5、移植腎超聲檢測(cè)：A組移植腎血供差，阻力指數(shù)0.7。D組移植腎血供豐富，阻力指

6、數(shù)介于0.3～0.6之間，A組與B組差別不明顯(P=0.06)， A組與C組差別明顯(P<0.05)，A組與D組差別明顯(P<0.05)。
　　 6、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)：A、B組大鼠脾細(xì)胞對(duì)供體SD大鼠或無(wú)關(guān)品系Lewis大鼠脾細(xì)胞的CPM值與空白對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05)。而對(duì)SD大鼠脾細(xì)胞，D組的CPM值較空白對(duì)照組明顯降低(P<0.01)，對(duì)Lewis大鼠脾細(xì)胞，上述三組的CPM與對(duì)照組比較未見(jiàn)顯著性差

7、異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、建立大鼠腎臟移植模型：供腎動(dòng)脈端端吻合，輸尿管導(dǎo)管作為支架，將其置入供受體腎靜脈斷端，行供受體腎靜脈端端吻合，行輸尿管膀胱瓣和受體膀胱壁吻合。此方法簡(jiǎn)便、易操作，手術(shù)成功率高。一般實(shí)驗(yàn)室均可開(kāi)展，對(duì)腎移植實(shí)驗(yàn)研究有應(yīng)用價(jià)值。
　　 2、通過(guò)大鼠腎臟移植受體在接受全身照射預(yù)處理后，輸注供體HSC可延長(zhǎng)受者存活時(shí)間，移植腎功能基本保持穩(wěn)定，短期內(nèi)未見(jiàn)排斥反應(yīng)，HSC可誘導(dǎo)