大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植誘導(dǎo)肝移植免疫耐受的研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察不同處理因素對(duì)大鼠肝移植術(shù)后大鼠生存時(shí)間的影響，探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合亞劑量FK506誘導(dǎo)肝移植術(shù)后免疫耐受的可行性及其可能機(jī)制。 材料和方法：首先建立穩(wěn)定可靠的大鼠原位肝移植動(dòng)物模型。選用雄性SD大鼠160只，分為供體組和受體組。應(yīng)用改良“二袖套法”進(jìn)行大鼠原位肝移植，通過(guò)熟練的顯微外科技術(shù)操作，縮短無(wú)肝期時(shí)間，并結(jié)合多項(xiàng)改良措施，保障手術(shù)成功。 取大鼠骨髓，分離、純化，體外擴(kuò)增骨髓MSC至第三代，

2、并行CFDA標(biāo)記。標(biāo)記的大鼠MSC行門(mén)脈注射，7d后進(jìn)行連續(xù)切片，DAPI染色并在熒光顯微鏡下觀察大鼠MSC歸巢情況。 采用近交系雌性L(fǎng)ewis大鼠和雌性BN大鼠共64只，LEWIS為供體(n=32)，BN為受體(n=32)，制作原位肝移植大鼠模型32只，分為4組。A組：受體肝在移植后于門(mén)靜脈注射1mL生理鹽水；B組：受體肝在移植后于門(mén)靜脈注射2×106MSCs；C組：受體肝在移植后于門(mén)靜脈注射1mL生理鹽水，給予治療劑量FK5

3、06(0.5mg/kg·d-1)；D組：受體肝在移植后于門(mén)靜脈注射2×106MSC，同時(shí)給予亞治療劑量FK506(0.125mg/kg·d-1)。全程觀察動(dòng)物全身情況，記錄存活時(shí)間，監(jiān)測(cè)術(shù)后14d血清谷丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)濃度水平，以及移植肝臟的病理變化；PCR半定量檢測(cè)血液SRY；流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)BN大鼠脾臟HIS19抗體，評(píng)估嵌合體的形成情況。 結(jié)果：聯(lián)合MSC移植和亞治療劑量FK506組生存時(shí)間(

4、52.8±4.1)d明顯長(zhǎng)于生理鹽水對(duì)照組(12.5±0.8)d和單純MSC注射組(12.7±1.2)d，與免疫抑制劑組(47.8±3.8)d相當(dāng)，其病理評(píng)分依據(jù)Banff方案也較生理鹽水對(duì)照組[重度(Ⅲ級(jí))]和單純MSC注射組[中度(Ⅱ級(jí))]明顯降低，為輕度(Ⅰ級(jí))。聯(lián)合MSC移植和亞治療劑量FK506組受體脾細(xì)胞中HIS19陽(yáng)性細(xì)胞含量達(dá)(13.0±2.5)％，較生理鹽水對(duì)照組(0.4±0.5)％、單純MSCs注射組(0.5±0.3

5、)％和治療劑量FK506注射組(1.4±0.9)％顯著增多(P<0.01)。另外，聯(lián)合MSC移植和亞治療劑量FK506組、治療劑量FK506注射組ALT水平分別為(49.48±9.70)U/L和(54.3±11)U/L，較生理鹽水對(duì)照組[(886.81±90.3)U/L]和單純MSC注射組[(869.7±109)U/L]顯著降低(P<0.01)：聯(lián)合MSC移植和亞治療劑量FK506組、治療劑量FK506注射組TBIL濃度分別為(13.5