氯磷酸鹽脂質(zhì)體對小鼠燙傷后瘢痕形成的影響和相關機制的研究.pdf

1、研究目的:
　　觀察氯磷酸鹽脂質(zhì)體(Clodronate liposomes)對小鼠燙傷后瘢痕形成的影響,并對其可能的調(diào)控機制進行探討。
　　材料與方法:
　　將60只昆明小鼠隨機分為3組:對照組、皮下注射組和腹腔注射組。燙傷創(chuàng)面制作成功后,對照組給予注射生理鹽水;皮下注射組在造成燙傷當天即在創(chuàng)面外緣1cm正常皮膚皮下注射氯磷酸鹽脂質(zhì)體50μl,術后第1天繼續(xù)予以注射氯磷酸鹽脂質(zhì)體50μl;腹腔注射組在造成燙傷當天即給

2、予腹腔注射氯磷酸鹽脂質(zhì)體200μl,術后第2天及第4天繼續(xù)予以腹腔注射氯磷酸鹽脂質(zhì)體200μl。在燙傷后第5天,切取創(chuàng)面組織做免疫組織化學染色,驗證氯磷酸鹽脂質(zhì)體對巨噬細胞的剔除效果。在整個實驗過程中,記錄每只小鼠創(chuàng)面愈合的時間。在創(chuàng)面愈合后2周處死小鼠,切取瘢痕組織,分別進行蘇木精-伊紅染色觀察組織大體情況;進行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)和蛋白免疫印跡技術(Westernblot)檢測氯磷酸鹽脂質(zhì)體對瘢痕組織中轉(zhuǎn)化生長因子-β

3、1(TGF-β1)和Ⅰ型膠原(collagenⅠ-α2)的mRNA和蛋白表達水平的影響。
　　結果:
　　1、CD68免疫組織化學染色結果:在對照組創(chuàng)面組織中可見較多的CD68+巨噬細胞,腹腔注射組創(chuàng)面組織中CD68+巨噬細胞數(shù)量明顯減少,皮下注射組創(chuàng)面組織中沒有CD68+巨噬細胞。
　　2、創(chuàng)面愈合時間統(tǒng)計結果:與對照組比較,皮下注射組和腹腔注射組創(chuàng)面愈合的時間均明顯延長,分別為35.1±0.8天,28.6±1.0天

4、和21.4±0.7天(P<0.001);與腹腔注射組比較,皮下注射組創(chuàng)面愈合時間明顯延長(P<0.001)。
　　3、HE染色結果:與對照組比較,皮下注射組和腹腔注射組膠原纖維減少,較為規(guī)則地分布于細胞間,毛細血管分布明顯減少,纖維細胞較纖細,未見明顯的環(huán)形或螺旋狀分布;腹腔注射組瘢痕組織形態(tài)與皮下注射組相似,但仍有較多新生血管、炎癥細胞,膠原纖維排列也較紊亂。
　　4、RT-PCR結果:與對照組比較,皮下注射組和腹腔注射組

5、小鼠瘢痕組織中TGF-β1mRNA表達均明顯降低(P<0.01和P<0.05);與腹腔注射組比較,皮下注射組小鼠瘢痕組織中TGF-β1mRNA表達明顯降低(P<0.05)。與對照組比較,皮下注射組和腹腔注射組小鼠瘢痕組織中collagenⅠ-α2mRNA表達均明顯降低(P<0.001和P<0.05);與腹腔注射組比較,皮下注射組小鼠瘢痕組織中collagenⅠ-α2mRNA表達明顯降低(P<0.05)。
　　5、WesternBl

6、ot結果:與對照組比較,皮下注射組和腹腔注射組小鼠瘢痕組織中TGF-β1蛋白表達均明顯降低(P值均<0.01),皮下注射組和腹腔注射組小鼠瘢痕組織中collagenⅠ-α2蛋白表達均明顯降低(P值均<0.001);與腹腔注射組比較,皮下注射組小鼠瘢痕組織中collagenⅠ-α2蛋白表達明顯降低(P<0.001)。
　　結論:
　　氯磷酸鹽脂質(zhì)體通過減少巨噬細胞產(chǎn)生的TGF-β1的表達和膠原的沉積,抑制了小鼠燙傷后瘢痕過度形